[发明专利]一种利用复合材料二次固定化汉逊德巴利酵母的方法

权利要求书

1.一种利用复合材料二次固定化汉逊德巴利酵母的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将汉逊德巴利酵母依次经种子斜面培养基活化、发酵培养基培养后，通过无菌纱布过滤分离汉逊德巴利酵母液体发酵菌种和发酵培养基，得汉逊德巴利酵母液体发酵菌种液；

S2、将海藻酸钠、活性炭的混合物与所得的汉逊德巴利酵母液体发酵菌种按照0.5∶1-1∶1(w/v)比例混合，得混合液；其中，海藻酸钠终浓度为25-35g/L，活性炭终浓度为8-10g/L；

S3、用注射器吸取混合液滴入浓度为19-21g/L的CaCl₂溶液内，室温固定1-3h，得直径0.3-0.5cm的固定化汉逊德巴利酵母小球，无菌纱布过滤分离小球后无菌水清洗2次；

S4、按照2-3个小球/mg过滤后的菌种的标准，将步骤S3所得的汉逊德巴利酵母小球与过滤分离后的上述S1步骤的液体发酵菌种混合，再加入聚乙烯醇和海藻酸钠并混匀，聚乙烯醇终浓度为80-100g/L，海藻酸钠终浓度在9-11g/L；用直径0.8cm吸管吸取混合液滴入浓度为9-11g/L的CaCl₂溶液内，室温固定1-3h，4℃冰箱固定1-3h，得直径0.8-1.2cm的固定化汉逊德巴利酵母小球，无菌纱布过滤分离小球后无菌水清洗2次；

S5、将步骤S4所得的汉逊德巴利酵母小球加入到80-120ml液体发酵培养基/250ml锥形瓶培养，28-32℃，在转速为220-280r/min的恒温振荡箱中培养48-72h；

第一次固定化后汉逊德巴利酵母小球直径为0.3cm，第二次固定化后汉逊德巴利酵母小球直径为1.2cm。

2.如权利要求1所述的一种利用复合材料二次固定化汉逊德巴利酵母的方法，其特征在于，所述步骤S2中海藻酸钠、活性炭的混合物与所得的汉逊德巴利酵母液体发酵菌种的混合比例为1∶1(w/v)。

3.如权利要求1所述的一种利用复合材料二次固定化汉逊德巴利酵母的方法，其特征在于，第一次固定化所用海藻酸钠终浓度为30g/L，第二次固定化所用海藻酸钠终浓度为10g/L。

4.如权利要求1所述的一种利用复合材料二次固定化汉逊德巴利酵母的方法，其特征在于，第一次固定化所用CaCl₂溶液的浓度为21g/L，第二次固定化所用CaCl₂终浓度为10g/L。

5.如权利要求1所述的一种利用复合材料二次固定化汉逊德巴利酵母的方法，其特征在于，第一次固定化所用活性炭终浓度为8g/L，第二次固定化所用聚乙烯醇终浓度为90g/L。