[发明专利]一种减少液体菌种培养过程操作污染的方法

权利要求书

1.一种减少液体菌种培养过程操作污染的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：

1）配制培养基

将配制好的培养基分装到培养管中；

2）消毒灭菌

对培养管中的培养基灭菌30—45分钟；

3）接种

在无菌条件下，将第一连接管（2）的两端分别插入至第一培养瓶（1）、第二培养瓶（3）中，从培养管中选取菌种块通过第一培养瓶（1）的开口置于第一培养瓶（1）的瓶内，封口，第一培养瓶（1）内装有固体培养基，第二培养瓶（3）为空瓶，第一培养瓶（1）内接种后，第一培养瓶（1）内固体培养基通过第一连接管（2）通入第二培养瓶（3）中，在18—20℃下培养，培养3—5天即可；

第三培养瓶（4）中装入液体培养基，第二培养瓶（3）与第三培养瓶（4）通过第二连接管（5）连接，待第一培养瓶（1）、第二培养瓶（3）内有菌落出现时，将第三培养瓶（4）中的液体培养基分别反压至第一培养瓶（1）、第二培养瓶（3）内进行深层培养，然后将第一培养瓶（1）、第二培养瓶（3）内培养好的菌种通过密闭管道反压至发酵罐中培养。

2.根据权利要求1所述的一种减少液体菌种培养过程操作污染的方法，其特征在于：所述菌种块面积为4mmx5mm—6mmx6mm。

3.根据权利要求2所述的一种减少液体菌种培养过程操作污染的方法，其特征在于：所述步骤2）中消毒灭菌的温度为121℃、压力为0.12MPa。

4.根据权利要求3所述的一种减少液体菌种培养过程操作污染的方法，其特征在于：所述培养管中选取的培养基体积为每支培养管体积的1/5-1/4。

5.根据权利要求1所述的一种减少液体菌种培养过程操作污染的方法，其特征在于：所述步骤2）中，培养管经消毒灭菌后，培养管与水平线呈15—45°，在室温下，开始接种，然后在恒温振荡器中于23—24℃下静置培养。

6.根据权利要求1所述的一种减少液体菌种培养过程操作污染的方法，其特征在于：所述接种是在超净工作台上操作。

7.根据权利要求6所述的一种减少液体菌种培养过程操作污染的方法，其特征在于：所述接种前对超净工作台紫外灯消毒25—30min。

8.根据权利要求7所述的一种减少液体菌种培养过程操作污染的方法，其特征在于：所述第一培养瓶（1）、第二培养瓶（3）、第三培养瓶（4）、第一连接管（2）、第二连接管（5）、培养管均经过消毒灭菌处理。