[发明专利]用于生产吩嗪‑1‑甲酰胺的基因工程菌株、制备方法及用途

权利要求书

1.一种高产吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌株，其特征在于，敲除了绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)HT66 CCTCC NO:M2013467及其衍生物基因组中的pykA基因，即得。

2.如权利要求1所述的高产吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌株，其特征在于，所述pykA基因的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

3.如权利要求1所述的高产吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌株，其特征在于，所述pykA基因的对应蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.一种如权利要求1、2或3所述的高产吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌株的制备方法，其特征在于，敲除所述pykA基因的方法为插入突变法或无痕敲除法。

5.如权利要求4所述的高产吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌株的制备方法，其特征在于，所述插入突变法敲除pykA基因包括如下步骤：

S1、扩增pykA基因片段，并插入pEX18Tc质粒中；

S2、扩增卡那霉素或庆大霉素等抗性基因，插入pykA基因中间，使pykA基因发生插入突变；

S3、将突变后的pykA基因与HT66基因组中的pykA基因发生同源重组，根据抗性筛选出阳性克隆，即可。

6.如权利要求4所述的高产吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌株的制备方法，其特征在于，所述无痕敲除pykA基因包括如下步骤：

A1、扩增pykA基因的上下游同源臂；

A2、融合PCR法连接上下游同源臂并插入pK18mobsacB质粒中；

A3、使重组质粒上的pykA基因的上下游同源臂片段与HT66基因组发生同源重组，利用蔗糖压力和抗性筛选出阳性克隆，即可。

7.一种用于培养权利要求1所述的基因工程菌株的培养基，其特征在于，包括如下组分：甘油、蛋白胨、酵母提取物、硫酸镁、磷酸氢二钾。

8.如权利要求7所述的培养基，其特征在于，包括按重量份数计的如下组分：

9.一种如权利要求1～3中任意一项所述的高产吩嗪-1-甲酰胺的基因工程菌株在生产吩嗪-1-甲酰胺中的用途。

10.如权利要求9所述的用途，其中，所述基因工程菌株在制备吩嗪-1-甲酰胺时的条件为：好氧培养；温度：28～32摄氏度；pH：6～8；转速200～350rpm。