[发明专利]一种生鲜乳新鲜度检测的方法

权利要求书

1.一种生鲜乳新鲜度检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、将采集的牛奶在干净的环境中分装于无菌管中，分成若干份，在4℃冰箱中按照时间梯度增加分别保存，然后将不同时间梯度的牛奶样品进行冷冻储存；

(2)、牛奶样品在室温下解冻后经离心机离心，除去脂肪层后收集清液，清液与冰浴的甲醇以1:2-3体积混合，涡旋混合均匀，超声10-30s后再静置20s，共10个循环，冰浴静置5-20min后离心收集上清液，上清液用旋转蒸发仪将甲醇除去，再用冷冻干燥仪冷冻干燥得到粉末样品；

(3)、将粉末样品溶于600μL-1mL磷酸盐缓冲液，涡旋混匀后离心，取上清液至核磁管中，用核磁共振光谱仪检测各个样品的小分子代谢物；

(4)、多元变量统计分析小分子代谢物随时间的变化，寻找出差异代谢物，然后绘制差异代谢物与保存时间之间的关系，其中，差异代谢物为随着保存时间的变化而变化的小分子代谢物；

(5)、将待检测牛奶样品按照步骤(1)-(3)处理后，测出差异代谢物的值，然后根据关系曲线计算代谢物的相对变化量，以此来对牛奶新鲜度进行评判；

步骤(4)中差异代谢物为乳清酸或三甲胺。

2.根据权利要求1所述的生鲜乳新鲜度检测的方法，其特征在于，所述步骤(2)中解冻后离心处理条件为2500-4000×g离心15-40min；冰浴静置后离心处理条件为10000-15000×g离心10-30min；所述步骤(3)涡旋混匀后离心处理条件为12000-15000×g离心10-30min，所述步骤(2)和步骤(3)离心均在4-6℃环境下操作。

3.根据权利要求1所述的生鲜乳新鲜度检测的方法，其特征在于，所述步骤(3)中磷酸盐缓冲液由0.1M NaH₂PO₄/K₂HPO₄、0.1％NaN₃和100％D₂O组成，其PH为7.4。

4.根据权利要求 1所述的生鲜乳新鲜度检测的方法，其特征在于，当牛奶中体细胞数为20万以下时，乳清酸代谢物的含量随着时间的增加而显著下降，差异代谢物选择乳清酸；当牛奶中体细胞数为100万以上时，三甲胺代谢物的含量随着时间的增加而显著增加，差异代谢物选择三甲胺。