[发明专利]一种人果糖二磷酸醛缩酶B基因检测方法及试剂盒

说明书

本发明提供了一种人果糖二磷酸醛缩酶B基因检测方法及试剂盒，所述检测试剂盒包括用于特异性扩增人果糖二磷酸醛缩酶B基因上3个多态性位点的引物对，3个多态性位点分别为A150P、A175D、N335K，所述引物对包括公共上游引物和分型下游引物，所述分型下游引物包括野生型特异引物和突变型特异引物。应用本发明的试剂盒可以快速高效检测人果糖二磷酸醛缩酶B基因3个多态性位点的基因型，是一种快速、简便、经济、高效的人果糖二磷酸醛缩酶B基因筛查试剂盒。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种人果糖二磷酸醛缩酶B基因检测试剂盒，及其检测方法。

背景技术

遗传性果糖不耐受症(Hereditary Fructose Intolerance，简称HFI)是为果糖代谢病的一种，为常染色体隐性遗传病，是由于醛缩酶B基因(ALDOB基因)突变致B型醛缩酶缺乏或活性降低，从而导致患者出现果糖代谢的异常。欧洲发病率约1:26100，而我国发病率目前尚不清楚。随着人民生活水平的提高，对糖的消费越来越多，HFI发病率会逐渐增多。

临床上遗传性果糖不耐受症患儿较少见，由于各种配方奶中大多含有蔗糖，所以出生后即人工喂养的新生患儿在2-3天内即可出现呕吐、腹泻、脱水、休克和出血倾向等急性肝功能衰竭症状。本病的临床诊断需要依靠血液生化检查和果糖耐量试验，但这两种方法均是损伤性的。采用分子生物学的方法辅助诊断具有损伤小、可行性好的优点。

现检测人果糖二磷酸醛缩酶B基因多态性的方法主要有直接测序和等位基因特异性寡核苷酸分析法(ASO)辅助检测。直接测序虽然准确率较高，但耗时长，成本高。等位基因特异性寡核苷酸分析法是利用PCR扩增产物后，变性在尼龙膜上点样，固定，然后用标记引物杂交，最后需放射自显影。这种方法的缺点在于操作复杂，对操作人员的技术要求高，需要放射显影，分辨率不高，耗时长。

发明内容

本发明旨在提供一种高准确性、低成本、高通量、快速的检测试剂盒，可用于检测人果糖二磷酸醛缩酶B基因是否存在突变。

本发明所采取的技术方案是：

一种人果糖二磷酸醛缩酶B基因检测试剂盒，所述检测试剂盒包括用于特异性扩增人果糖二磷酸醛缩酶B基因上3个多态性位点的引物对，3个多态性位点分别为A150P、A175D、N335K，所述引物对包括公共上游引物和分型下游引物，所述分型下游引物包括野生型特异引物和突变型特异引物，对应3个多态性位点的公共上游引物、野生型特异引物和突变型特异引物如下表所示：

表1、各个多态性位点的引物序列

F代表公共上游引物，W代表野生型特异引物，M代表突变型特异引物。

优选地，每个公共上游引物的5'端标记有荧光染料。所述荧光染料是FAM、HEX、TAMRA、ROX、Cy3、Cy5、JOE、VIC、PET中的一种或多种。

本发明所述人果糖二磷酸醛缩酶B基因检测试剂盒还包括对照基因序列，所述对照基因序列包括正常序列和突变序列。

所述正常序列：