[发明专利]一种利用单片段置换系改良水稻抽穗扬花期耐热性的分子育种方法

权利要求书

1.一种利用单片段置换系改良水稻抽穗扬花期耐热性的分子育种方法，其特征在于：包括：

(1)以保藏号为CGMCC NO.12532的中籼两系骨干恢复系9311为母本，保藏号为CGMCC NO.12534的元江普通野生稻染色体单片段置换系YJ07-04-06为父本，杂交1代，回交3代，再自交3代获得稳定纯合株系BC₃F₄，每代都是单穗收获；

(2)种植BC₁F₁，应用SDS法提取DNA，采用所述的元江野生稻染色体单片段置换系YJ07-04-06对应的分子标记引物对RM6515和RM8069(表1)进行PCR扩增，选择同时含有上述4个来源于元江普通野生稻的分子标记条带，分子量分别是404bp和184bp的单株与轮回亲本9311回交，种子按单株收获；其中分子标记引物对RM3394正/反向序列为SEQ ID NO.1/SEQ ID NO.2，RM6223正/反向序列为SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.4；

表1 引物特征带大小及序列

(3)分子标记辅助第二次选择：种植BC₂F₁，每株提取DNA后，再利用所述的分子标记引物对确定BC₁F₁单株的基因型，同时具有2个来源于上述野生稻的分子标记条带，分子量分别是404bp和184bp的单株继续与轮回亲本9311回交；

(4)分子标记辅助第三次选择：种植BC₃F₁，每株提取DNA后，继续利用所述的分子标记引物对确定BC₃F₁单株的基因型，同时具有4个来源于上述元江普通野生稻的分子标记条带，分子量分别是404bp和184bp的单株自交，按单穗收获种子；

(5)分子标记辅助第四次选择：种植BC₃F₂，每株提取DNA后，继续利用所述的分子标记引物对确定BC₃F₂单株的基因型，同时具有2个来源于上述元江普通野生稻的分子标记条带，分子量分别是404bp和184bp的单株自交获得BC₃F₃，按单穗收获种子。

2.根据权利要求1所述的一种利用单片段置换系改良水稻抽穗扬花期耐热性的分子育种方法，其特征在于：品系2014年在人工模拟高温胁迫下表现为结实率为59.3％，比轮回亲本结实率增加18.5％；单株产量位23.45g,比轮回亲本增加7.15g,株高116.1厘米，穗长24.3厘米，每穗实粒数97.6粒，比轮回亲本平均增加30.1粒；结实率为59.3％，比轮回亲本结实率增加18.5％，均达到极显著差异；表2显示在抽穗期高温胁迫写下该选系(“元野2号”)的结实率、每穗实粒数和单株产量平均值较9311极显著增加，株高、穗长、单株有效穗、每穗总粒数值较9311差异不显著。

表2 9311和元野2号在抽穗扬花期高温处理和对照温度下的表现

**表示在0.01水平存在显著性差异。