[发明专利]检测植原体的LAMP引物组及其试剂盒和应用有效
| 申请号： | 201610801184.0 | 申请日： | 2016-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN106399490B | 公开（公告）日： | 2019-12-27 |
| 发明（设计）人： | 林彩丽;王圣洁;王胜坤;田国忠;于少帅;王曦茁;汪来发;朴春根;李永;郭民伟 | 申请（专利权）人： | 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 11598 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 余光军;霍雪梅 |
| 地址： | 100091 北京市海淀区东小府*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 植原体 特异性强 长春花 试剂盒 黄化 苦楝 莴苣 检测 萎缩 核苷酸序列 保守序列 灵敏度 引物组 引物 制备 应用 | ||
1.检测泡桐丛枝、苦楝丛枝、桑萎缩、莴苣黄化和长春花绿变植原体的LAMP引物组，其特征在于：由一对内引物对和外引物对组成；
其中，所述外引物对是由SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的核苷酸序列组成；所述内引物对是由SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的核苷酸序列组成。
2.一种检测泡桐丛枝、苦楝丛枝、桑萎缩、莴苣黄化和长春花绿变植原体的LAMP试剂盒，包括：LAMP引物、LAMP反应液RM、
3.一种应用权利要求2所述的LAMP试剂盒检测泡桐丛枝、苦楝丛枝、桑萎缩、莴苣黄化和长春花绿变植原体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）提取待测样品DNA；（2）以待检测样品的DNA为模板，以权利要求1所述的LAMP引物组为扩增引物，建立LAMP反应体系进行等温基因扩增；（3）对扩增产物的结果进行判定。
4.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：所述LAMP反应体系包含：权利要求1所述LAMP引物组，LAMP反应液RM，
5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：所述LAMP反应体系为45μL，包含：10μM SEQID No.2和SEQ ID No.3所示的引物各 0.5μL，40μM SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的引物各1μL，2×LAMP反应液RM12.5μL，8U/μL
6.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：所述等温基因扩增为63℃恒温反应40~60min，80℃灭活5~10 min。
7.按照权利要求6所述的方法，其特征在于：所述等温基因扩增为63℃恒温反应60min，80℃灭活5min。
8.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）对扩增产物的结果进行判定：将扩增产物置于恒温荧光检测仪或者荧光PCR仪中，实时读取荧光信号，若出现“S”型扩增曲线则判定为阳性反应，即样品中感染有植原体，若无“S”型扩增曲线则判定为阴性；或，在扩增产物中显色液，在日光下，肉眼观察反应管中颜色的变化，若扩增产物变为翠绿色则判定为阳性反应，即样品中感染有植原体，若扩增产物仍为棕黄色则判定为阴性。
9.权利要求1所述的LAMP引物组在泡桐丛枝、苦楝丛枝、桑萎缩、莴苣黄化和长春花绿变植原体的早期诊断和病原菌的监测与鉴定中的应用。
10.权利要求2所述的LAMP试剂盒在泡桐丛枝、苦楝丛枝、桑萎缩、莴苣黄化和长春花绿变植原体的早期诊断和病原菌的监测与鉴定中的应用。
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