[发明专利]一种利用等温核酸扩增技术检测鸟胞内分枝杆菌复合体的方法在审
| 申请号： | 201610805565.6 | 申请日： | 2016-09-07 |
| 公开（公告）号： | CN107805666A | 公开（公告）日： | 2018-03-16 |
| 发明（设计）人： | 陈淑丹;郭利川;刘小曼;刘伟;汤赛君;王智宏;王秀东;应清界 | 申请（专利权）人： | 江苏奇天基因生物科技有限公司;浙江国际旅行卫生保健中心 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
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| 地址： | 214135 江苏省无锡*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 等温 核酸 扩增 技术 检测 鸟胞内 分枝杆菌 复合体 方法 | ||
1.一种利用等温核酸扩增技术检测鸟胞内分枝杆菌复合体的方法，该检测方法包括等温核酸扩增体系，引物组和反应缓冲液，扩增在等温条件35-45oC下进行，10-40分钟内即可检出鸟胞内分枝杆菌复合体。
2.根据权利要求1所述的检测鸟胞内分枝杆菌复合体的方法，其特征在于，所述等温核酸扩增体系及各组分含量为以下所示。
3.根据权利要求1、2所述的检测鸟胞内分枝杆菌复合体的方法，其特征在于，所述的体系状态为冷冻干燥后的粉末状。
4.根据权利要求1所述的检测鸟胞内分枝杆菌复合体的方法，其特征在于，所述的反应缓冲液为终浓度为4%-7%(w/v)的，分子量为20000的聚乙二醇水溶液。
5.根据权利要求1、2所述的引物组，其特征在于，所述的引物序列为：
正向引物：5’-TGCRCAACAGCAAATGATTGCCAGACACACTAT-3’
反向引物：5’-ATGCGCCCTTAAACACTTACTTACACACA-3’。
6.根据权利要求1、2所述的检测鸟胞内分枝杆菌复合体的方法，其特征在于，在体系中加入核酸外切酶和探针，可实现实时检测。
7.根据权利要求6所述的核酸外切酶，其特征在于，核酸外切酶为核酸外切酶III。
8.根据权利要求6所述的探针，其特征在于，所述的探针序列为：
5’- TGAGACAACACTCGGTCVRTCCGTGTGGAGTCCCTCCATCTTGGTGGT-3’，其中，所使用的荧光探针为荧光/猝灭基团修饰的探针。
9.根据权利要求1所述的检测鸟胞内分枝杆菌复合体的方法，其特征在于，扩增的最佳等温条件为37oC，最佳时间为40分钟。
10.根据权利要求6所述的检测鸟胞内分枝杆菌复合体的方法，其特征在于，扩增的最佳等温条件为39oC，最佳时间为20分钟。
11.根据权利要求1-10所述的检测鸟胞内分枝杆菌复合体的方法，其特征在于，可用反应缓冲液将体系重新溶解，体系体积可以是25 μL、50 μL、100 μL中的任一个体积或其它体积，最佳体积为50 μL。
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