[发明专利]检测基因P53的比率电化学DNA传感器修饰电极及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及电化学检测技术领域，具体涉及一种用于检测肿瘤抑制基因P53的比率电化学DNA传感器修饰电极及其制备方法。

背景技术

肿瘤抑制基因P53是一种被称为“基因组的守护者”的抑癌基因，是一系列同工型蛋白质(P53蛋白)的同源基因。由该基因编码的一系列蛋白质具有调控细胞分裂、修复和凋亡的作用。当细胞受损时，P53蛋白会监测细胞基因的受损程度。在基因受损程度较小时，P53蛋白会促使细胞进行自我修复；而在受损基因不可修复时，P53蛋白则会诱导细胞凋亡。因此，当P53基因突变时，细胞的修复凋亡过程会受到干扰，从而使一部分受损细胞在不正常的条件下继续分裂生长，从而导致肿瘤的产生。

国际癌症基因组协会已经证明，P53基因是在人类癌症有关的基因中突变最为频繁的基因。在人类已知的所有恶性肿瘤组织中，该基因出现突变的概率在50％以上，是迄今为止人类发现的与癌症相关性最高的基因。

现有的对于P53基因的检测主要有毛细管电泳、变性高效液相色谱、变性梯度凝胶电泳以及酵母中分离的等位基因功能分析技术等方法，这些方法虽然有高的灵敏度，但是存在操作复杂，成本高等诸多缺点；同时仪器投入费用高和耗材贵，也限制了这些方法的临床应用。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的之一是提供一种用于检测P53基因的探针，目的之二是提供一种用于检测P53基因的探针在制备检测P53基因的修饰电极中的应用，目的之三是提供一种用于检测P53基因的修饰电极的制备方法，目的之四是提供一种用于检测P53基因的修饰电极，目的之五是提供一种修饰电极在制备用于检测P53基因的电化学传感器中的应用，目的之六是提供一种基于双发夹结构的用于检测P53基因的比率电化学DNA传感器的应用方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明一方面，提供一种用于检测P53基因的探针，由一条单链DNA辅助探针S1和一条单链DNA捕获探针S2组成，所述S1的DNA链序列为：5’-Fc-CTC TCA GTG ATT TTT TTA GTG AGA GAG-(CH₂)₆-SH-3’，所述S2的DNA链序列为：5’-MB-TCA CTG AGT CTT CCA GTG TGA TGA TCA CT-3’。

本发明第二方面，提供一种利用上述检测P53基因的探针在制备检测P53基因的修饰电极中的应用。

本发明第三方面，提供一种用于检测P53基因的修饰电极的制备方法，步骤如下：

(1)辅助探针S1在含有三(2-羧乙基)膦的Tris-HCl缓冲液中加热，退火获得单链辅助探针S1的Tris-HCl缓冲液；

(2)将打磨、清洗干燥后的金电极浸在步骤(1)得到的辅助探针S1的Tris-HCl缓冲液中，通过自组装的方式将辅助探针S1修饰到金电极表面，得到S1/GE修饰电极；

(3)将步骤(2)所得电极浸在捕获探针S2的Tris-HCl缓冲液中，水浴加热，使捕获探针S2与辅助探针S1结合，在金电极表面形成双发夹结构，得到S2/S1/GE修饰电极；

优选：所述步骤(2)中打磨、清洗干燥的具体步骤为：将金电极用氧化铝粉末打磨抛光成镜面，再分别经乙醇、二次蒸馏水超声清洗20-60s，氮气干燥，得到清洁金电极。

优选：所述步骤(1)中90℃水浴加热4-6分钟。

优选：所述步骤(1)中含有三(2-羧乙基)膦的Tris-HCl缓冲液的为含有浓度为110-150mM的三羟甲基氨基甲烷(Tris)，100-120mM的NaCl，1-10mM的MgCl₂，9-11mM的三(2-羧乙基)膦的混合液，pH为7.4-7.8。

优选：所述步骤(2)、(3)中Tris-HCl缓冲液为含有浓度为110-150mM的三羟甲基氨基甲烷(Tris)，100-120mM的NaCl，1-10mM的MgCl₂，pH为7.4-7.8。

优选：所述步骤(2)中将辅助探针S1修饰到金电极表面的条件为：反应温度为22-25℃反应时间为10-24小时，辅助探针S1缓冲液的浓度为40-50mM(即：缓冲液中辅助探针S1的浓度)。

优选：所述步骤(3)中加热操作具体为：水浴35-37℃加热1-3小时，所述捕获探针的浓度为35-50mM。