[发明专利]一种经济快速提取酒醅中微生物基因组DNA的方法

权利要求书

1.一种经济快速提取酒醅中微生物基因组DNA的方法，包括以下步骤：

1）酒醅中微生物细胞破壁：将研磨剂、酒醅样品和裂解液混和后高速震荡，然后离心；所述的研磨剂为石英砂；所述的石英砂粒径为12-20目；所述裂解液配方如下：1.5-2.5%CTAB (w/v)，90-112 mM pH 8.0的Tris-HCl，18-24mM pH8.0的EDTA，1.2-1.6 M NaCl；所述研磨剂、酒醅样品和裂解液三者的比例依次为15～22g:6～9g:16～24mL；

2）核酸纯化：

a)除杂：取步骤1）中离心后的上清液加入P.C.I混匀，离心；所述的P.C.I为24-26体积苯酚：23-25体积氯仿：0.5-1.5体积异戊醇；所述P.C.I与上清液的体积比为0.8～1.2：1；

b)过柱：将离心后的上清液与硅胶膜结合液混匀，然后过核酸纯化柱，离心弃滤液；所述的硅胶膜结合液为pH为4-6.5的盐酸胍与乙酸钾的混合液；所述上清液与硅胶膜结合液的体积比为1:1.5～2.5；所述盐酸胍与乙酸钾的摩尔质量比为：3-4M：0.5M；

c)洗柱：加入70%乙醇过核酸纯化柱，然后高速离心甩干核酸纯化柱，自然条件下干燥；

d)洗脱：在核酸纯化柱的硅胶膜上加洗脱液溶解DNA，离心洗脱下DNA溶液；所述洗脱液选自无菌水或TE溶液。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的石英砂粒径为16目。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）中，研磨剂、酒醅样品和裂解液三者的比例依次为18.5g:7.5g:20mL。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）中，裂解液配方为：2% CTAB (w/v)，100 mM pH 8.0的Tris-HCl，20 mM pH 8.0的EDTA，1.4 M NaCl。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a）中，所述的P.C.I为25体积苯酚：24体积氯仿：1体积异戊醇，P.C.I与上清液的体积比为0.8～1.2：1。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b）中，

硅胶膜结合液为pH为5的盐酸胍与乙酸钾的混合液。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b）中，

盐酸胍与乙酸钾的摩尔质量比为：4M：0.5M。

8.如权利要求 1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将12～20目的石英砂灭菌烘干后，称取15～22g装入50mL无菌离心管中；

称取6～9g酒醅样品于离心管，加入16～24mL裂解液，均质仪震荡1min，10000rpm离心10min；

转移上清至50mL无菌离心管中，加0.8～1.2mL的P.C.I，摇匀，11000rpm离心20min；所述的P.C.I为25体积苯酚：24体积氯仿：1体积异戊醇；

转移上清至50mL无菌离心管中，加1.5～2.5mL的硅胶膜结合液，摇匀；用15mL核酸纯化柱过滤，弃滤液，滤完为止；

吸附柱中加2.5～3.5mL 70%乙醇，过滤，弃滤液，重复一次；

10000rpm空管离心2min，弃滤液；

纯化柱自然条件下干燥30～60min，加入50～300μL无菌去离子水或TE溶液溶解DNA，过滤，滤液装于1.5mL无菌离心管中，-20℃保存备用。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的裂解液配方为2% CTAB (w/v)，100 mMpH 8.0的Tris-HCl，20 mM pH8.0的EDTA，1.4 M NaCl。

10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的硅胶膜结合液pH为5；所述的硅胶膜结合液为4M盐酸胍：0.5M乙酸钾。