[发明专利]一种灭活乳酸菌疫苗佐剂

说明书

本发明涉及一种灭活乳酸菌疫苗佐剂，属于生物医药领域。这种佐剂的主要成分是灭活乳酸菌，可以通过将活的乳酸菌经过常规方法灭活制备。灭活乳酸菌可以作为人或动物各种疫苗的佐剂，用于增强疫苗免疫效果，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药领域，尤其涉及一种灭活乳酸菌疫苗佐剂。

背景技术

佐剂是非特异性免疫增强剂，主要作用是提升机体免疫系统对抗原的免疫应答反应或改变免疫应答类型。佐剂最广泛的用途就是用来提高人和畜禽疫苗的抗体水平预防传染性疾病发生。目前常用的佐剂包括以下种类：(1)铝盐佐剂：是一类含有铝离子的无机盐佐剂，如氢氧化铝凝胶和明矾。该类佐剂作为一种吸附剂，能从溶液中强烈吸附蛋白质抗原，形成沉淀。将其接种到机体后可形成一个“抗原库”，缓慢释放出抗原，充分延长了抗原的作用时间，同时还能促进注射部位巨噬细胞的应答，但铝盐佐剂存在一定缺陷，主要表现为有轻度局部反应，可形成肉芽肿。(2)弗氏佐剂：弗氏佐剂是含油佐剂的一种，含有矿物油和灭活结核分支杆菌等成分，对体液免疫和细胞免疫具有很强的激活作用，但也具有很强的副作用，特别是皮下注射时在注射部位引起强烈的炎症和溃疡。由于注射部位强烈的副反应，该佐剂主要用于试验方面的免疫研究，很少用于制备疫苗。(3)免疫刺激复合物：是由皂苷、胆固醇、磷脂混合后自发形成的一种具有较高免疫活性的脂质小泡，主要适用于提高亚单位疫苗的免疫原性。然而，该佐剂在使用上也存在一些限制性因素，如不适合与含亲水基团多的抗原混合制备疫苗。(4)细胞因子佐剂：细胞因子是具有重要生物学活性的细胞调节蛋白，包括淋巴因子和单核因子，如白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子等。细胞因子佐剂在许多动物模型系统中都是有效的免疫佐剂。但由于细胞因子在体内半衰期太短且造价昂贵，故未能在传统疫苗中广泛应用。(5)天然来源免疫佐剂：从天然物质中提取的某些成份，发现具有免疫佐剂活性，如蜂胶佐剂、多糖佐剂、黄酮佐剂、皂苷佐剂等。这类佐剂因其来源天然、毒性较低、容易代谢等优点，在免疫佐剂研究中越来越受到重视。(6)微生物来源的佐剂：由微生物的有效成分制成的佐剂，主要有脂多糖、胞壁酰二肽、霍乱毒素、CpG免疫调节序列等。2006年张七斤等人报道将乳酸杆菌通过超声破碎、胰蛋白酶处理和三氯乙酸去除共价结合的磷壁酸等过程提取得到的肽聚糖以及经过酚、氯仿和异戊醇等处理得到的DNA，添加到新城疫油乳剂灭活疫苗及禽流感(H5)亚型油乳剂灭活疫苗中，对家禽进行免疫，可以提高两种疫苗的抗体水平(张七斤，宋新宇，张和平，孟和毕力格.乳酸杆菌成分对疫苗免疫增强作用的研究.第三届第八次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集，2006：258-262)。(7)其他种类的疫苗佐剂还有脂质体、纳米粒子佐剂、粘膜免疫佐剂等。

以上的佐剂种类较多，但特点各异，如有的佐剂制作简单，但有一定副作用缺陷，如铝盐佐剂和弗氏佐剂；有的佐剂制备较为复杂，成本较高，如细胞因子佐剂和微生物来源的佐剂；有的安全性较高，可能效用有待提高，如天然来源免疫佐剂等。而我们发现将乳酸菌经过常规的方法灭活，无需再做进一步处理就可作为免疫佐剂使用。灭活乳酸菌作为佐剂具有制备简单、成本便宜、不良反应小、增强疫苗免疫效果确切等优点，特别是作为畜禽疫苗佐剂使用，对肉食品无有害物质残留，更利于保证肉食品安全，未来具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明提供了一种全新的灭活乳酸菌疫苗佐剂，这种佐剂的主要成分为灭活的乳酸菌，灭活乳酸菌可以作为人和动物的各种疫苗佐剂用于提高疫苗抗体水平。

一种疫苗组合物，其包含疫苗成分和佐剂，其中佐剂包含灭活乳酸菌完整菌体。所述的保持完整菌体形态是指与灭活前活菌菌体的轮廓和形态基本一致。所说的基本一致实质上是指乳酸菌灭活过程中菌体细胞壁可能会出现轻微变化，比如部分表面成分的流失，但这种变化微乎其微或很少发生。

疫苗每单位剂量包含灭活乳酸菌完整菌体数量为10⁵—10¹²个。所述的乳酸菌选自乳杆菌属、肠球菌属、乳球菌属、双歧杆菌属、明串球菌属、链球菌属。灭活乳酸菌为单一菌或两种以上灭活乳酸菌混合物。