[发明专利]发酵生产春雷霉素的专用菌株及其应用

说明书

本发明涉及一种发酵生产春雷霉素的专用菌株及其应用。本发明从牡丹江海林市某蔬菜地土壤中分离到一株好氧放线菌，通过对该放线菌进行紫外及化学诱变处理，最终获得一株高产春雷霉素的菌株BJX007，其保藏编号为CGMCC No.11622。经鉴定，菌株BJX007为小金色链霉菌(Streptomyces microaureus)，其发酵生产春雷霉素的能力高，产量可达25000μg/mL发酵液，且菌株BJX007连续传代5次后其生产春雷霉素的能力仍保持原有水平，表明其遗传稳定性好，可用于工业化大规模春雷霉素的生产。本发明为利用生物发酵技术生产春雷霉素提供了宝贵的微生物资源。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，具体地说，涉及一种发酵生产春雷霉素的专用菌株及其应用。

背景技术

春雷霉素(Kasugamycin)又称春日霉素，是由放线菌产生的氨基糖苷类抗生素，属内吸抗生素，兼有治疗和预防作用，纯品为白色针状结晶固体，在常温下稳定，酸性和中性条件下稳定，在碱性条件下易分解。水剂形式为深绿色液体，常温下可贮存2年以上，对环境友好，是较理想的农用杀菌剂，在农业生产上得到广泛应用，对水稻上的稻瘟病有优异防效和治疗作用，此外对防治西瓜细菌性角斑病，桃树流胶病，疮痂病，穿孔病等病害有特效。

发明内容

本发明的目的是提供一种发酵生产春雷霉素的专用菌株--小金色链霉菌BJX007。

本发明的另一目的是提供菌株BJX007在发酵生产春雷霉素中的应用。

为了实现本发明目的，本发明从牡丹江海林市横道河子附近的蔬菜地中分离到一株放线菌，具体方法如下：将土壤制成悬液，将土壤悬液接种于分离培养基中进行培养，挑取单菌落进行稀释划线分离纯化，获得纯培养菌株。按照《真菌鉴定手册》索引表进行菌株形态鉴定。

经鉴定，该菌株为好氧放线菌，孢子丝呈螺旋形，孢子球形至卵圆形，中间凸起，表面光滑，在合成培养基上气生菌丝为灰白色，基内菌丝为土黄色。

其中，所述分离培养基配方如下：胰蛋白胨3g/L，豆饼粉10g/L，甘油10mL/L，氯化钠3g/L，碳酸钙2g/L，琼脂粉25g/L，pH值自然。所述合成培养基配方如下：玉米淀粉20g/L，豆饼粉45g/L，氯化钠2.5g/L，磷酸二氢钾0.2g/L，豆油12mL/L，淀粉酶0.1g/L，pH值自然。

对该株放线菌进行以下诱变处理：

(1)紫外诱变两次：取菌悬液5ml，加入无菌培养皿中，用30W的紫外照射仪于30cm高度处垂直照射。设定照射时间分别为60s、90s。分离培养基灭菌后，加入终浓度0.1μg/ml、0.2μg/ml经过滤除菌的链霉素，铺制平皿，28℃培养10d。挑取单菌落按照上述方法进行高通量筛选、摇瓶复试。获得的高产春雷霉素菌株进行下一步诱变。

(2)亚硝酸钠(NIT)诱变

将经过紫外诱变筛选到的菌株，制备该菌株的菌悬液，取10mL菌悬液分别加入250mL锥形瓶中，瓶中装有90mL含不同浓度(0、5、10、20、40、60和80mg/L)NIT的硅酸盐改性培养基，在30℃、200r/min条件下处理40min，然后离心分离菌体沉淀，并用无菌水洗涤3次，除去NIT，终止诱变。然后取各诱变菌液1mL稀释后涂布于改性培养基琼脂平板上，在30℃下培养7d后进行菌落计数，确定最佳诱变剂量并挑取该诱变剂量下的菌落进行初筛与复筛。得到高产春雷霉素的菌株继续进行化学诱变处理。

(3)氯化锂处理

将经过NIT诱变筛选到的菌株，制备该菌株的孢子悬液，取10mL孢子悬液(孢子数10⁸个/mL)，按1％的浓度加入LiCl，在摇床上振荡10h、12h、15h、20h，终止诱变，取各诱变菌液1mL稀释涂布于琼脂培养基平板上，在28℃下培养10d后进行菌落计数，确定最佳诱变剂量并挑取该诱变剂量下的菌落进行初筛和复筛，最终获得一株高产春雷霉素的菌株BJX007。