[发明专利]一种产脂肪酸乙酯的解脂耶氏酵母基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种产脂肪酸乙酯解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，其是将含有蜡酯合成酶基因OWS的重组载体转化尿嘧啶和亮氨酸营养缺陷型解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）构建而成，所述蜡酯合成酶基因OWS的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示。

2.如权利要求1所述的产脂肪酸乙酯解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述的重组载体为质粒p32-OWS，所述质粒p32-OWS的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.2所示；和/或，所述尿嘧啶和亮氨酸营养缺陷型解脂耶氏酵母为解脂耶氏酵母Po1f。

3.如权利要求1所述的产脂肪酸乙酯解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于，所述的重组载体为质粒为质粒p32-UTO，质粒p32-UTO的核苷酸序列如序列表SEQ ID No. 3所示。

4.一种产脂肪酸乙酯的方法，其特征在于，其包括以下的步骤：培养如权利要求1~3中任一项所述的产脂肪酸乙酯解脂耶氏酵母基因工程菌，添加十二烷进行两相发酵得发酵液，萃取发酵液的十二烷相；

还包括在所述两相发酵时添加外源的乙醇。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，添加所述十二烷的体积为培养基体积的10%；

开始添加所述乙醇的时间为所述两相发酵的第12小时；添加所述乙醇的频率为每12小时添加1次；和/或，所述乙醇的浓度为2~7%，所述百分比为乙醇和发酵体系的体积百分比。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述乙醇的浓度为5%~7%，所述百分比为乙醇和发酵体系的体积百分比。

7.一种制备如权利要求1~3中任一项所述的产脂肪酸乙酯解脂耶氏酵母基因工程菌的方法，其特征在于，其包括以下的步骤，

（1）构建含有蜡酯合成酶基因OWS重组载体，所述蜡酯合成酶基因OWS的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示；

（2）将步骤（1）构建的含有蜡酯合成酶基因OWS重组载体转化解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）。

8.一种用于制备上述的解脂耶氏酵母基因工程菌的重组载体，其特征在于，其含有蜡酯合成酶基因OWS，所述蜡酯合成酶基因OWS的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1所示；

所述的重组载体为质粒p32-UTO，所述质粒p32-UTO的核苷酸序列如序列表SEQ IDNo.3所示。

9.如权利要求1~3中任一项所述的产脂肪酸乙酯解脂耶氏酵母基因工程菌在制备脂肪酸乙酯中的应用。