[发明专利]壳聚糖修饰的AgI/TiO2复合物及其构建比色免疫传感器用于氯霉素检测的方法

权利要求书

1.壳聚糖修饰的AgI/TiO₂复合物的制备方法，其特征在于按照如下的步骤进行：

步骤一、将TiO₂纳米颗粒浸泡在AgNO₃和壳聚糖的混合溶液中，搅拌2小时，之后加入KI溶液，继续搅拌2小时，将溶液离心清洗，即制得壳聚糖修饰的AgI/TiO₂复合物，记为CS-AgI/TiO₂；

步骤二、将步骤一制备好的CS-AgI/TiO₂复合物用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N-羟基琥珀酰亚胺NHS活化30分钟，然后加入氯霉素抗体anti-CAP，震荡6-12小时，离心清洗得到氯霉素抗体和CS-AgI/TiO₂的结合物，记为anti-CAP-CS-AgI/TiO₂；

步骤三、将氨基化的四氧化三铁MB用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC和N-羟基琥珀酰亚胺NHS活化30分钟，然后加入氯霉素-BSA的结合物，震荡6-12小时，磁性分离，得到氯霉素-BSA修饰的磁珠，记为CAP-BSA/MB。

2.根据权利要求1所述的壳聚糖修饰的AgI/TiO₂复合物的制备方法，其特征在于：步骤一中TiO₂纳米颗粒的量为1-1.8a毫克，AgNO₃的量为20-36a毫升，浓度为0.1毫摩尔/升，壳聚糖的量为20-36a毫升，质量百分比浓度为0.5 %，KI的量为20-36a毫升，浓度为0.1毫摩尔/升；步骤二中CS-AgI/TiO₂复合物的量为1-1.8b毫升，EDC的量为15-27b毫克，NHS的量为11-20b毫克，氯霉素抗体anti-CAP的量为500-900b微升，浓度为1毫克/毫升；步骤三中氨基化的四氧化三铁MB的量为c毫升，浓度为1毫克/毫升，EDC的量为15-27c毫克，NHS的量为11-20c毫克，氯霉素-BSA的量为500-900c微升，浓度为1毫克/毫升；a、b、c为正整数。

3.利用权利要求1制备的壳聚糖修饰的AgI/TiO₂复合物构建比色免疫传感器用于氯霉素检测的方法，其特征在于：将CAP-BSA/MB依次孵育不同浓度的氯霉素和anti-CAP-CS-AgI/TiO₂，然后用水清洗2-5次，构建成免疫传感器，随后加入ABS缓冲液和四甲基联苯胺TMB溶液，利用氙灯即波长λ ≥ 400的光照射5分钟，通过紫外分光光度计检测TMB的紫外吸收来定量氯霉素的浓度。

4.根据权利要求3所述的壳聚糖修饰的AgI/TiO₂复合物构建比色传感器用于氯霉素检测的方法，其特征在于：ABS缓冲液的量为2-3.6d毫升，pH为4；TMB的量为100-180d微升，浓度为12毫摩尔/升，d为正整数。

5.根据权利要求3所述的壳聚糖修饰的AgI/TiO₂复合物构建比色免疫传感器用于氯霉素检测的方法，其特征在于：依次孵育不同浓度的氯霉素和anti-CAP-CS-AgI/TiO₂是指将CAP-BSA/MB依次在氯霉素和anti-CAP-CS-AgI/TiO₂的混合液中保持在室温下孵育40 分钟，氯霉素浓度依次为0纳克/毫升、0.05纳克/毫升、0.15纳克/毫升、0.45纳克/毫升、1.35纳克/毫升、4.05纳克/毫升，anti-CAP-CS-AgI/TiO₂的浓度每次不变为1毫克/毫升。

6.根据权利要求3所述的壳聚糖修饰的AgI/TiO₂复合物构建比色免疫传感器用于氯霉素检测的方法，其特征在于：通过紫外分光光度计检测TMB的紫外吸收来定量氯霉素的浓度是指氯霉素浓度与吸光度成线性相关性，对应的线性方程为y=-0.17941 lg x + 0.37998，其中，x是氯霉素的浓度，单位是纳克/毫升，y是检测的吸光度。