[发明专利]一种长链非编码RNAlnc‑HR1用途及克隆方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种长链非编码RNA lnc-HR1用途及其克隆方法。

背景技术

临床慢性肝炎、脂肪肝等肝病，主要是由于病毒感染、不合理的饮食、致病细菌感染、药物损伤等引发的脂类在肝脏的代谢异常，从而引发相关的症状。针对大量中性脂类在肝脏内的大量累积，可能应发肝纤维化甚至造成肝硬化肝细胞肝癌等严重的肝病，目前的治疗方法首先是给予患者降脂酶，降低肝脏内脂类的积累，最终恢复肝脏和血液中脂类的含量达到正常值。但是对于常用的降脂药物，只能降低肝脏和血液中脂类的含量，并不能直接抑制脂类的合成，需要长期用药。

发明内容

本发明的目的是提供一种lnc-HR1用途及其克隆方法，实现从源头抑制肝脏内脂类的合成。

为了解决上述技术问题，本发明提供的一种lnc-HR1用途及其克隆方法是这样实现的：

一种长链非编码RAN lnc-HR1的克隆方法，包括：提取细胞的总RNA，在所述总RAN中加入逆转录酶，所述总RAN逆转录成cDNA，以所述cDNA为PCR反应模板克隆得到所述lnc-HR1；所述PCR反应的体系为50ul，所述PCR反应组分为：primescript 1 step Enzyme Mix 2μl，2×1 step buffer 25μl，Template RNA 1μg，Primer(up)10μM 2μl，Primer(down) 10μM 2μl和RNase free water 18μl。

可选的，所述PCR反应的循环条件为：34循环（50°C 30min，92°C 2min ，94°C 30s，56°C 30s，72°C 80s，4°C保温 ）。

可选的，所述PCR反应的引物为：

上游序列：5’-GGAGAATAGCTTTCTTCCTGGAACT-3’

下游序列：5’-CCGCATGCCACAGTTTTTACTTCTTC-3’。

长链非编码RAN lnc-HR1在制备治疗肝癌药物、制备治疗肝炎药物、制备治疗脂肪肝药物或制备降脂药物中的应用。

长链非编码RAN lnc-HR1在制备降低肝脏中脂肪药物中的应用。

长链非编码RAN lnc-HR1在制备降脂药物中的应用，所述脂为甘油三酯。

长链非编码RAN lnc-HR1在制备治疗肝癌药物中的应用中，所述肝癌为肝细胞肝癌。

长链非编码RAN lnc-HR1在制备治疗肝癌药物、制备治疗肝炎药物、制备治疗脂肪肝药物或制备降脂药物中的应用；所述药物抑制甘油三酯的合成。

本发明提供的长链非编码RAN lnc-HR1的克隆方法，提取的lnc-HR1能够抑制SREBP-1c的合成，而SREBP-1c是甘油三酯合成的关键因子，实现抑制甘油三酯的合成。现有技术中，由于lnc-HR1在细胞中含量较少，从细胞中提取lnc-HR1异常困难，通常得不到完整的lnc-HR1；本发明相对于现有技术实现从细胞中提取完整的lnc-HR1，实现从源头抑制肝脏内脂类的合成，有效的降低脂类的含量和保护肝脏。

本发明从Huh7细胞中提取总RNA、克隆lnc-HR1， 构建lnc-HR1的真核表达载体（pMIR-lncHR1），然后将lnc-HR1的真核表达载体转染到Huh7细胞中，经过一段时间的培养，实时荧光定量PCR检测细胞中lnc-HR1、固醇调节元件结合蛋白（SREBP-1c）的mRNA；使用2-△△Ct法分析mRNA转录水平的变化，结果如下：lncHR1的表达量随着pMIR-lncHR1剂量的增加而梯度升高，SREBP-1c 的 mRNA表达水平受到lncHR1的抑制，并且呈剂量依赖性，最终受抑制率达到50%左右。将转染了pMIR-lncHR1的Huh7细胞裂解，进一步验证在蛋白质水平上lncHR1对SREBP-1c的抑制作用， western blot结果显示：随着lncHR1剂量的增加，SREBP-1c的蛋白表达受到抑制。因此，长链非编码RAN lnc-HR1可以作为活性成分制备成药物，用于治疗由于脂类的代谢异常引起的肝病。

附图说明

图1是本发明提供的lnc-HR1复制电泳图；

图2 是本发明构建的真核表达载体pMIR-DFT图谱；

图3是本发明提供的pMIR-lncHR1剂量与lncHR1表达关系图；

图4是本发明提供的lncHR1剂量与SREBP-1c 的 mRNA表达关系图；

图5是本发明提供的lncHR1剂量与SREBP-1c的关系图；