[发明专利]一种大银鱼与太湖新银鱼的分子鉴别方法

说明书

本发明公开了一种大银鱼与太湖新银鱼的分子鉴别方法。一种大银鱼与太湖新银鱼的分子遗传鉴别方法，包含以下步骤：(1)分别提取待鉴定的大银鱼与太湖新银鱼基因组DNA；(2)以提取的基因组DNA为模板，PCR扩增大银鱼与太湖新银鱼的Ctyb基因；(3)扩增产物纯化后，直接测序，Cytb基因第45位点碱基是T的为大银鱼，该位点是C的为太湖新银鱼。该方法能快速、简便、准确、有效地鉴别大银鱼与太湖新银鱼，结果稳定性好，重复率高，填补了目前国内分子生物学标准鉴别大银鱼与太湖新银鱼的空白。

技术领域

本发明属于遗传学领域，涉及一种大银鱼与太湖新银鱼的分子鉴别方法。

背景技术

中国是世界银鱼的起源地和主要分布区，在中国东部各大水系及湖泊中广泛分布。银鱼营养价值和经济价值均很高，是重要的经济鱼类，呈创造了巨大的经济效益。银鱼生活周期短、世代离散、生殖力和定居能力强。作为典型的r-对策者,银鱼对环境变化敏感且反应迅速,种群消长快。然而我国的银鱼天然资源却因围湖造田、过度捕捞、环境污染和生境破碎化等多种因素的影响而持续衰退,各种银鱼的天然资源都不同程度地下降,物种分布范围显著缩小,个别物种渐危，开展银鱼资源调查和保护工作迫在眉睫。大银鱼和太湖新银鱼是两种常见的银鱼种类，两者体色及形态相似，很难区分和鉴别。

发明内容

本发明的目的是针对形态区分的困难，提供一种大银鱼与太湖新银鱼的分子遗传鉴别方法。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种大银鱼与太湖新银鱼的分子遗传鉴别方法，包含以下步骤：

(1)分别提取待鉴定的大银鱼与太湖新银鱼基因组DNA；

(2)以提取的基因组DNA为模板，PCR扩增大银鱼与太湖新银鱼的细胞色素b基因(Ctyb)；

(3)扩增产物纯化后，直接测序，Cytb基因第45位点碱基是T的为大银鱼，若该位点是C的为太湖新银鱼。

所述的用于PCR扩增大银鱼与太湖新银鱼的细胞色素b基因的上游引物为L14321：SEQ ID NO.1，下游引物为H15634：SEQ ID NO.2。

所述的PCR反应体系为50μL：100ng/μL的模板DNA 1μL，PCR缓冲液5μL，dNTP混合液4μL，每种dNTP 0.1mmol/L，10μmol/L的上、下游引物各1μL，2μL 2.5IU的Taq酶；双蒸水36μL；所述的PCR缓冲液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0，0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl₂，0.01％(g/100ml)明胶组成；PCR扩增反应程序为：94℃预变性4min，94℃变性40s，55℃退火40s，72℃延伸90s，经35个循环后再72℃延伸10min。

一种用于大银鱼与太湖新银鱼的分子遗传鉴别的引物对，上游引物为L14321：SEQID NO.1，下游引物为H15634：SEQ ID NO.2。

本发明所述的引物对在分子遗传鉴别大银鱼与太湖新银鱼中的应用。

本发明所述的引物对在制备大银鱼与太湖新银鱼分子遗传鉴别试剂中的应用。

一种大银鱼与太湖新银鱼分子遗传鉴别试剂，包含本发明所述的引物对。

所述的大银鱼与太湖新银鱼分子遗传鉴别试剂，还优选包括PCR缓冲液和dNTP混合液，所述的PCR缓冲液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0，0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl₂，0.01％明胶组成。

有益效果：