[发明专利]一种提高禽流感疫苗毒株增殖滴度的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域；具体说来，本发明确立了一种提高H5亚型禽流感疫苗毒株增殖滴度的方法，用于疫苗的生产，降低生产成本，在生产上有较大的使用价值。

背景技术

禽流感是由禽流感病毒引起的一种禽类传染病。禽流感病毒根据血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的不同，可分为16个HA亚型和9个NA亚型。高致病性禽流感是由某些H5或H7亚型禽流感病毒引起的严重威胁禽类的烈性传染病。

2003年以来，H5亚型高致病性禽流感一直在包括中国在内的多个国家和地区流行，给养禽业造成了严重的经济损失。目前，疫苗仍然是防控该病的重要手段。2005年，我国开始实施针对禽流感的大规模强制性免疫政策，并取得了显著成效。随着病毒的不断变异，疫苗也从Re-1更新到目前的Re-6、Re-7、Re-8。生产中发现，Re-7在鸡胚上的增殖滴度要明显低于Re-6和Re-8的滴度。这就使得Re-7疫苗生产的成本要高于Re-6和Re-8疫苗的生产成本。本专利提供了一种提高Re-7疫苗毒株增殖滴度的方法。

发明内容

本发明针对上述Re-7疫苗毒株增殖滴度的不足，研究建立了一种提高Re-7疫苗毒株在鸡胚上增殖滴度的方法。首先利用定点突变技术，将Re-7疫苗毒株的HA基因进行突变，使其编码的第171位氨基酸突变为异亮氨酸（I）或缬氨酸（V），再利用反向遗传操作技术重新获得重组病毒。将重组病毒接种鸡胚，能够显著提高Re-7疫苗毒株的增殖滴度。

具体实施方式

下面通过实施例，说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于这个实施例。

本实施例利用定点突变技术，对Re-7禽流感疫苗毒株HA基因进行点突变，使其编码的第171位氨基酸由原来的苏氨酸（T）突变为异亮氨酸（I）或缬氨酸（V），再利用反向遗传操作技术重新获得重组病毒。将突变之前的Re-7疫苗株和突变后的重组病毒接种10日龄SPF鸡胚，37°C孵化72小时，其HA滴度分别达到9和11，突变后的重组病毒比突变之前的疫苗毒株提高了2个HA滴度。