[发明专利]一种快速高效同时检测土壤、污泥中11种抗生素含量的方法

说明书

本发明提供了一种同时检测土壤中11种抗生素的方法，采用UPLC‑MS/MS方法检测抗生素，以加标法确定检测方法的回收率。本方法主要采用SAX与HLB小柱串联的形式对提取的抗生素进行萃取纯化，使用UPLC/MS/MS检测。本发明所述方法是一种回收率高，重复性好，能够快速批量同时检测土壤中抗生素的新型方法，步骤简便，快速，所检测抗生素10分钟内全部分离开，检测限低，适于低含量的抗生素检测，为检测环境中抗生素污染，监测抗生素含量，研究抗生素降解转化机理，提供了便捷条件。

技术领域

本发明属于环境污染物的检测技术领域，具体涉及一种快速高效检测土壤、污泥中氯霉素、氟苯尼考、呋喃唑酮、恩诺沙星、氧氟沙星、土霉素、红霉素、磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、氨苄青霉素和四环素11种类抗生素的方法。

背景技术

由于抗生素具有很好的抗菌作用，被广泛的用于人和动物的疾病治疗，尤其在畜牧业与水产养殖业的使用量非常大，这使得在国内外的环境基质和食品中均检测到了不同浓度的抗生素。环境中抗生素含量不仅严重扰动了土壤微生物基因库，影响生态系统安全，还能通过食物链的传递富集进入到高级动物体内，危害人和动物的健康。

建立快速、准确、同时测定土壤和污泥等固相基质中多种抗生素是研究和控制抗生素生态风险的基础。截止目前，抗生素的检测方法主要包括微生物检测法，免疫分析法，理化检测法三大类。其中，理化检测法检出限最低，是目前应用最广泛的抗生素检测方法。然而，土壤和污泥中抗生素及代谢产物种类繁多且浓度低，而土壤和污泥本身的各种有机或无机杂质都会干扰抗生素的检测。因此，如何有效除杂、快速定性定量成为检测抗生素的重点。

UPLC/MS/MS检测技术通过测质荷比丰度从而得到离子流色谱图，专属性较强，所以干扰较少，定性准确。液质联用灵敏度高，检测限低且分析时间短，适于检测痕量抗生素，能够快速高效同时检测多种抗生素，在土壤和污泥中抗生素检测方面具有广泛的应用前景。

发明内容

本发明的目在于提供一种能够同时地检测土壤中多种抗生素的方法，能够快速高效的检测土壤中多种类抗生素，其检测限低，灵敏度高且检测速度快。

技术方案

(1)土壤、污泥样品的采集、保存与前期处理

采集0～20cm表层土壤在-20℃条件下避光保存。对于底泥，采集保存时注意赶出空气，使用冷冻干燥机冷干，研磨过40目筛子，-20℃冷藏。

(2)配制土壤、污泥抗生素提取液

称取含有两个结晶水的磷酸二氢钠3.12g，加入200μL浓磷酸，用超纯水定容至100ml，得到pH＝3的磷酸缓冲溶液。将色谱级乙腈与磷酸缓冲溶液按照体积比7：3混合，得到土壤提取液。

(3)提取土壤、污泥中抗生素

称取土壤或污泥样品1g(精确到0.0001g)于50ml离心管中，依次加入0.2gNa₂EDTA和10mL土壤、污泥抗生素提取液(见(1))。涡旋1分钟，超声10分钟，离心(8000转)15分钟，收集上清液。此过程共重复3次。将得到的上清液合并后，用超纯水稀释至400ml。使用0.45μm有机相微孔滤膜抽滤。

(4)固相萃取富集并浓缩抗生素

使用SAX和HLB小柱进行固相萃取：将SAX柱和HLB柱通过SPE连接柱小件连接起来置于固相萃取真空装置上。依次使用6ml色谱级甲醇和6mL超纯水对小柱进行活化和冲洗。随后，使用大容量采样管将抗生素提取液(见(2))与固相萃取柱连接，打开真空泵进行固相萃取。结束后，用超纯水清洗固相萃取小柱，真空干燥30分钟。弃去SAX小柱。使用2×5mL色谱级甲醇将抗生素从HLB小柱中洗脱于15mL试管中，50℃水浴条件下高纯氮气吹至近干。添加1mL色谱级甲醇再次溶解抗生素后，使用0.22μm针式滤膜转移至2mL进样小瓶中，上机测定。