[发明专利]用于检测转基因大豆的引物和探针组合、检测方法及试剂盒

权利要求书

1.引物对和探针组合，其特征在于，所述引物对和探针组合包括第一组引物对、第二组引物对、第一探针和第二探针，所述第一组引物对包含SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述第一探针与所述第一组引物对相对应，所述第一探针包含SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；所述第二组引物对包含SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列，所述第二探针与所述第二组引物对相对应，所述第二探针包含SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的引物对和探针组合在检测或辅助检测转基因大豆DAS81419和大豆内源基因，或制备检测或辅助检测转基因大豆DAS81419和大豆内源基因的产品中的应用。

3.一种用于对转基因大豆进行检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对和探针组合。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：

荧光定量PCR扩增试剂，所述荧光定量PCR扩增试剂包括dNTPs、Mg²⁺、PCR反应缓冲液和Taq DNA聚合酶，所述dNTPs、Mg²⁺、PCR反应缓冲液和Taq DNA聚合酶均来源于Takara公司的货号为RR390A的试剂盒中所包含的试剂；

所述试剂盒还包括DNA提取试剂，所述DNA提取试剂包括来自达安基因的货号为DA-Z146的核酸提取试剂、Promega公司的货号为A1120的Wizard Genomic DNA purification kit或TaKaRa公司的货号为9781的MiniBEST Plant Genomic DNA Extraction Kit中所包含的试剂；

所述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照。

5.权利要求3或4所述的试剂盒在检测或辅助检测转基因大豆DAS81419和大豆内源基因，或制备检测或辅助检测转基因大豆DAS81419和大豆内源基因的产品中的应用。

6.一种检测或辅助检测转基因大豆DAS81419和大豆内源基因的双重荧光PCR方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)双重荧光PCR扩增

以生物样品含有的DNA为模板利用权利要求1所述的引物对和探针组合或权利要求3-4中任一项所述试剂盒进行双重荧光PCR扩增；

2)根据双重荧光PCR扩增的结果判断生物样品是否为转基因大豆DAS81419，同时判断样品是否含有大豆成分，或生物样品是否含有转基因大豆DAS81419和/或大豆成分的品系特异性基因成分。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤1)之前还包括在生物样品中提取DNA的步骤；

所述在生物样品中提取DNA是采用达安基因的货号为DA-Z146的核酸提取试剂盒、Promega公司的货号为A1120的Wizard Genomic DNA purification kit或TaKaRa公司的货号为9781的MiniBEST Plant Genomic DNA Extraction Kit进行的。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述双重荧光PCR扩增的反应体系如下：

所述Probes Master 2×conc来源于Takara公司的货号为RR390A的试剂盒。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述双重荧光PCR扩增的反应体系如下：所述SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5中所示引物的用量均为0.5μL，所述SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6中所示探针的用量分别为0.2μL和0.1μL；

所述双重荧光PCR扩增反应条件：95℃3min；95℃、5～10s，60℃、25～60s，40循环。