[发明专利]一种基于金-石墨烯纳米组装体对Mucin-1手性信号超灵敏检测的方法

权利要求书

1.一种基于金-石墨烯纳米组装体对Mucin-1手性信号超灵敏检测的方法，其特征在于：将偶联有Mucin-1适配体的金纳米粒子和偶联有与Mucin-1适配体部分互补序列的石墨烯组装得到金-石墨烯纳米组装体；存在有待测物Mucin-1时，组装体的结构发生改变，金纳米粒子从组装体上解离，进而引起组装体手性信号的改变，从而实现对Mucin-1的超灵敏检测；

具体步骤如下：

（1）检测传感器的构建：

a、金纳米粒子上修饰Mucin-1适配体Mucin-1 aptamer：采用柠檬酸还原法合成的金纳米粒子，将其离心浓缩后，重悬于超纯水中，浓度为5nM；取100μL浓缩重悬后的金纳米粒子，加入到含有2μL 10μM巯基化的Mucin-1 aptamer和终浓度为50mM的NaCl溶液中，37℃孵育过夜，得到偶联了Mucin-1 aptamer的金纳米粒子溶液，待用；

b、石墨烯偶联Mucin-1适配体部分互补序列Mucin-1 CS：取破碎后的石墨烯用超纯水稀释使终浓度为0.1mg/mL；按EDC、NHS和石墨烯的摩尔比为1000︰1000︰1，加入EDC和NHS，在避光的情况下反应2h；之后，用截留量30k的超滤管过滤，用pH为7.5、10mM的PB缓冲液重悬；向其中加入终浓度2μM的Mucin-1 CS，反应3h，得到石墨烯- Mucin-1 CS溶液，待用；

c、金-石墨烯纳米结构的组装：取100μL步骤a制备的金纳米粒子偶联Mucin-1 aptamer溶液7500rpm离心10min，除去上清；取100μL步骤b制得的石墨烯-Mucin-1 CS溶液用超滤管过滤；最后两种过滤物混合于100μL含有50mM NaCl、50mM Mg(NO₃)₂和质量浓度为0.01%的十二烷基硫酸钠SDS的10mM TBE 缓冲液中，杂交12h；梯度离心，用超纯水重悬，得到高产率的金-石墨烯纳米组装体；

（2）圆二色光谱检测：建立金-石墨烯纳米组装体手性信号与Mucin-1浓度的标准曲线，根据Mucin-1浓度与金-石墨烯纳米组装体手性信号强度的关系建立两者之间的标准曲线，从而应用手性信号对Mucin-1浓度进行检测。

2.根据权利要求1所述基于金-石墨烯纳米组装体对Mucin-1手性信号超灵敏检测的方法，其特征在于步骤（2）具体如下：金纳米粒子偶联Mucin-1 aptamer，石墨烯偶联 Mucin-1CS，两者混合于100μL含有50mM NaCl、50mM Mg(NO₃)₂和质量浓度为0.01% SDS的10mM TBE缓冲液后，分别加入不同浓度的目标物Mucin-1，室温孵育12h，由于Mucin-1会与Mucin-1aptamer的特异性结合，随着Mucin-1浓度的增加，金-石墨烯纳米组装体会有不同程度的解离，因此得到不同的手性信号强度；根据Mucin-1浓度与金-石墨烯纳米组装体手性信号强度的关系建立两者之间的标准曲线，从而应用手性信号对Mucin-1浓度进行检测。

3.根据权利要求1所述基于金-石墨烯纳米组装体对Mucin-1手性信号超灵敏检测的方法，其特征在于：所述Mucin-1 aptamer序列为：5’-SH-AAAAAGCAGT TGATCCTTTGGATACCCTGG T-3’；

Mucin-1 CS序列为：5’- SH-AAAAAATCCA AAGGATGTTC TG-3’。