[发明专利]一种鲜冬虫夏草鲜度的测定方法

权利要求书

1.一种鲜冬虫夏草鲜度的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)供试品溶液制备：

a.将鲜冬虫夏草进行前处理后，切片，厚度为1～2mm；

b.取步骤a中鲜冬虫夏草切片置于质量分数为0.3％的2,3,5-氯化三苯基四氮唑溶液中，37℃恒温避光染色，染色后，在暗室中用蒸馏水洗涤切片；

c.将步骤b染色后的切片破碎，用有机溶剂在避光、50-60℃恒温萃取至切片为白色，得到萃取液，即为供试品溶液；

(2)对照品溶液制备：

将质量分数为0.3％的2,3,5-氯化三苯基四氮唑溶液与质量分数为0.1％连二亚硫酸钠以1:5的体积比混合反应生成三苯基甲臜，离心，沉淀部分用无水乙醇溶解得母液，取母液用无水乙醇配制不同浓度梯度的三苯基甲臜溶液，即为对照品溶液；

(3)吸光光度值OD₄₈₅测定：

使用酶标仪在485nm波长处测步骤(1)、(2)中供试品溶液与对照品溶液的吸光值；

(4)鲜度计算：

根据步骤(3)中三苯基甲臜对照品的浓度与对应吸光值OD₄₈₅，建立两者标准曲线方程；结合标准曲线方程和测定的供试品吸光度值计算供试品中三苯基甲臜的质量浓度c1，进而计算每克鲜冬虫夏草样品中表征其鲜度的脱氢酶活力X，X＝(c1*v)/m；

其中X表示样品中脱氢酶的活力，μg/g；

c1表示根据标准曲线方程计算所得的供试品溶液中三苯基甲臜的浓度，μg/mL；

m表示样品的质量，g；

v表示萃取液的体积，mL。

2.根据权利要求1所述的鲜冬虫夏草鲜度的测定方法，其特征在于，步骤(1)中所述前处理方法为：将整根鲜冬虫夏草浸泡于37℃的5％葡萄糖溶液中15min。

3.根据权利要求1所述的鲜冬虫夏草鲜度的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述切片部位为鲜冬虫夏草虫体头部起第4-7对足区段。

4.根据权利要求3所述的鲜冬虫夏草鲜度的测定方法，其特征在于，步骤(1)所述切片部位为鲜冬虫夏草虫体头部起第4-7对足区段的中间部位。

5.根据权利要求1所述的鲜冬虫夏草鲜度的测定方法，其特征在于：步骤(1)所述染色的时间为2h。

6.根据权利要求1所述的鲜冬虫夏草鲜度的测定方法，其特征在于：步骤(1)所述有机溶剂为无水乙醇。

7.根据权利要求1所述的鲜冬虫夏草鲜度的测定方法，其特征在于：步骤(1)中鲜冬虫夏草切片与萃取用有机溶剂的质量体积比为1:25，g/mL。

8.根据权利要求1所述的鲜冬虫夏草鲜度的测定方法，其特征在于：步骤(1)中萃取时间为20-30min。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的鲜冬虫夏草鲜度的测定方法，其特征在于：所述2，3，5-氯化三苯基四氮唑溶液用pH 7.3-7.5的磷酸缓冲液溶解配制而成。