[发明专利]一种鸡肠炎沙门氏菌感染抗性分子标记的检测方法及其应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，提供了一种鸡肠炎沙门氏菌感染抗性分子标记‑‑相关基因LRP5的检测方法及其应用，该方法提供了以鸡LRP5基因rs80757564位点作为分子标记，对应提供了分型引物和对应PCR条件，利用上述引物和方法，可以准确检测鸡感染肠炎沙门氏菌后LRP5基因的基因型，选择肠炎沙门氏菌感染抗性强的个体，为鸡抗肠炎沙门氏菌感染的育种提供理论依据。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，提供了一种鸡肠炎沙门氏菌感染抗性分子标记--相关基因LRP5的检测方法及其应用。

背景技术

肠炎沙门氏菌属于革兰氏阴性杆菌，超过2500多种血清型，不仅能引起畜禽发病，造成养殖业严重经济损失，而且也是食源性疾病的主要病原菌之一，能通过家禽副产品给人类的健康带来较大威胁，是报道最频繁的致病微生物之一。有关报道指出，2004年期间，在美国每1百万人中有19000人因感染沙门氏菌而住院，多达300人因沙门氏菌感染出现死亡；在欧盟，2010年间约有99020起因沙门氏菌感染引起的食源性疾病暴发。

家禽及其相关加工产品是肠炎沙门氏菌的主要传染源，肠炎沙门氏菌能够透过蛋壳进入鸡蛋产品中，且能在生殖道中寄存繁殖。目前控制沙门氏菌感染的方法主要是使用疫苗和抗生素，但这不能从根本上解决问题，而且抗生素的大量使用会引起食品安全问题及细菌的耐药性，且造成菌株耐药性增强。随着分子遗传学的发展，提高畜禽对疾病和病原的遗传抗性，为控制沙门氏菌感染提供可能性，但是现有技术中缺乏相应的技术启示存在。

发明内容

本发明的发明人针对上述现有技术的情况，提供了一种鸡肠炎沙门氏菌感染抗性分子标记--相关基因LRP5的检测方法及其应用，该方法提供了以鸡LRP5基因rs80757564位点作为分子标记，对应提供了分型引物和对应PCR条件，利用上述引物和方法，可以准确检测鸡感染肠炎沙门氏菌后LRP5基因的基因型，为鸡抗肠炎沙门氏菌感染的育种提供理论依据。

发明人提供的具体技术方案如下：

本发明所述的鸡肠炎沙门氏菌感染抗性分子标记为相关基因LRP5基因rs80757564位点；

发明人首先根据鸡LRP5基因rs80757564位点两侧序列，设计用于基因分型的引物。

利用所设计引物，发明人进行PCR反应，其PCR扩增反应体系如下表：

基因分型PCR体系(20uL)

PCR反应程序：95℃2min，40个循环(94℃30s，56℃90s，65℃30s)，65℃10min。根

据上述方法扩增后对扩增产物进行测序，获得每个个体的基因型，之后利用SAS方差分析和平板计数法，获得鸡盲肠内容物含菌量与SNP基因型相关性结果，见下表：

SNP位点基因型和盲肠内容物肠炎沙门氏菌含菌量相关性分析

可见不同基因型个体的盲肠含菌量存在明显差异，TT型个体盲肠含菌量显著高于GG型个体(P0.01)，GG基因型个体对肠炎沙门氏菌感染抗性高于TT基因型。该位点可以作为鸡肠炎沙门氏菌抗性育种的分子标记，在实际育种过程中，可以选择GG基因型个体，以提高鸡群对肠炎沙门氏菌感染的抗性。从而实现鸡肠炎沙门氏菌感染抗性分子标记在鸡抗肠炎沙门氏菌感染的育种中的应用。

上述过程中的待测鸡只为人工接种鸡只，方法如下：

利用平板计数法，对刚孵化的济宁百日鸡进行肠炎沙门氏菌阴性检测，选择190只肠炎沙门氏菌阴性个体进行接种试验。