[发明专利]一种基于CdSe/ZnS量子点纳米簇的电化学发光生物传感器及其制法和应用

权利要求书

1.一种基于CdSe/ZnS量子点纳米簇的电化学发光生物传感器，其特征是：在金电极表面修饰磁性纳米金棒后连接细胞适体，然后组装纳米金-DNA引发链，最后固定CdSe/ZnS量子点纳米簇电化学发光信号探针，构建电化学发光生物传感器。

2.一种制备权利要求1所述的CdSe/ZnS量子点纳米簇电化学发光探针的方法，其特征是它由下列步骤组成：

步骤1.NaHSe的制备：0.0950g的NaBH₄加入10mL的离心管中，在离心管中加入6mL的去离子水，加入磁子搅拌溶解，通氮气排出多余的氧气，称取0.0947g的Se粉快速加入体系中，在常温下搅拌至无色透明(即Se粉完全溶解)

步骤2.CdSe量子点的制备：将0.5709g的CdCl₂·2.5H₂O加入100mL的三口烧瓶中，50.0mL的去离子水溶解，通氮气排出多余的氧气，移取400μL的巯基乙酸加到三口烧瓶中，用1M的NaOH调pH至10-11，溶液变得澄清透明，然后把制得的NaHSe溶液迅速加入到三口烧瓶中，加热沸腾30-40min得淡黄色澄清溶液。

步骤3.CdSe@ZnS量子点的制备：将制得的CdSe量子点溶液在水浴中保持45℃，分别在5mL的去离子水中溶解0.21g NaS·9H₂O和0.25gZnSO₄，然后将两溶液交替加入到CdSe量子点中，反应30min，冷却至室温，即得到CdSe@ZnS量子点。所得量子点于棕色瓶中避光保存备用。

步骤4.CdSe/ZnS量子点-发夹DNA信号探针的组装(溶液b)：按照使用说明，将带有氨基的发夹DNA H1和H2溶解，再稀释至浓度为1.0×10^-5M，以备实验使用。取100μL的CdSe@ZnS-COOH的量子点加入到1.5mL的离心管中，加入10μL的0.1mol/L的EDC和10μL的0.025mol/L的NHS溶液，室温下活化反应30min。活化后离心管中加入100μL的H1和H2，室温下反应16h后10000rpm下离心重新分散至100μL溶液，记为溶液b，保存备用。

3.一种采用权利要求1所述的基于CdSe/ZnS量子点纳米簇信号探针的电化学发光生物传感器，以及采用该生物传感器检测癌细胞的分析方法。其特征是它由下列步骤组成：

步骤1.纳米金-DNA引发链的组装(溶液a)：取1mL的金胶溶液，按一定的比例加入P1和S1，在37℃下震荡温育16h，反应完全后在10000rpm下离心30min后重新分散至100μL，记为溶液a，4℃下保存备用。

步骤2.将带有适体DNA的电极浸入到溶液a中，用铝箔纸封好后，在37℃的条件下震荡温育1～2h后用pH＝7.4的PBS缓冲溶液冲洗未反应的溶液，然后将此标记的电极浸入到溶液b中，同样用铝箔纸封好，在37℃的条件下震荡温育1～2h，取回电极用pH＝7.4的PBS缓冲溶液冲洗未反应的溶液，制成检测细胞的ECL的生物传感器。

步骤3.癌细胞的电化学发光(ECL)检测。将ECL传感器分别与100μL含有不同浓度(例如1000个细胞每毫升)细胞的PBS溶液震荡温浴45～60分钟。

将步骤3处理后的基于CdSe/ZnS量子点纳米簇的电化学发光传感器清洗，在含有0.05M K₂S₂O₈和0.1M KCl的0.1M PBS(pH 7.4)缓冲液中，进行电化学发光的测试，发光强度与待测样品(癌细胞)的浓度成线性关系。

4.根据权利要求3所述的癌细胞检测方法，其特征是：所述的电化学发光测试是以修饰好的金电极(基于CdSe/ZnS量子点纳米簇的电化学发光传感器)为工作电极、Pt电极为对电极、甘汞电极为参比电极的三电极体系，用MPI-A型电致化学发光仪，在0到-1.5V进行循环伏安扫描，光电倍增管高压设为500～700V。