[发明专利]一种以萝卜为原材料制备高纯度还原型萝卜硫苷的方法

说明书

本发明公开了一种以萝卜为原材料制备高纯度还原型萝卜硫苷的方法：萝卜原材料干燥，粉碎；提取剂回流提取萝卜原材料粉末；水溶解提取萝卜提取物，重复溶解提取；酸性氧化铝低压柱色谱初步纯化；亲水C‑18低压柱色谱进一步纯化，得干燥的高纯度还原型萝卜硫苷。本发明的原材料价廉易得，适用范围广，采用提取剂和水溶解提取还原型萝卜硫苷提取物，同时沉淀除去大量亲脂性杂质成分，显著提高了总体工艺产率和提取物中还原型萝卜硫苷的含量；采用酸性氧化铝低压柱吸附和亲水C‑18低压柱吸附相结合，显著提高还原型萝卜硫苷产品的纯度及收率，降低了生产成本，简化了提取纯化工艺过程，易于工业化放大生产。

技术领域

本发明属于植物活性组分的提取纯化技术领域，具体涉及一种以萝卜为原材料制备高纯度还原型萝卜硫苷的方法。

背景技术

近年来，大量流行病学研究表明，十字花科蔬菜具有显著的化学预防癌症的作用，经常大量食用十字花科蔬菜的人群患多种癌症的概率显著低于不食用或少量食用十字花科蔬菜的人群，即十字花科蔬菜的摄入量与多种癌症的发病率呈现显著的负相关性，说明十字花科蔬菜中含有的天然活性成分具有预防癌症的功效。进一步研究表明，十字花科蔬菜中含有大量的硫代葡萄糖苷和黑芥子酶，硫代葡萄糖苷分布于细胞液中，而黑芥子酶分布于特定的蛋白体中。在十字花科蔬菜组织细胞完好的情况下，硫代葡萄糖苷与黑芥子酶不能相互接触，硫代葡萄糖苷可稳定存在。当组织细胞发生损伤时，黑芥子酶可与硫代葡萄糖苷接触，硫代葡萄糖苷被快速水解，形成不稳定的糖苷配基，该糖苷配基通过非酶催化的分子内重排反应，转化生成具有高效抗癌活性的异硫氰酸酯类化合物，因此，在人们食用十字花科蔬菜的过程中，十字花科蔬菜能够生成并释放具有高效抗癌活性的异硫氰酸酯类化合物，从而具有了抗癌防癌的功效。

萝卜是一种人们日常大量食用的十字花科蔬菜，萝卜芽苗、萝卜根茎和萝卜叶子中都含有丰富的还原型萝卜硫苷(4-甲硫基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷，化学结构见图2)和黑芥子酶，黑芥子酶可将还原型萝卜硫苷水解，并通过非酶催化的分子内重排反应转化生成还原型萝卜硫素(4-甲硫基-3-丁烯基异硫氰酸酯)。还原型萝卜硫素是具有诱导Ⅱ相解毒酶活性的一种异硫氰酸酯类化合物，其不仅可提高人体对致癌物的清除能力，还可抑制并杀死癌细胞。研究表明，还原型萝卜硫素可通过阻断癌细胞周期循环以及促进癌细胞凋亡而阻碍肿瘤组织的生长；还原型萝卜硫素可作为细胞致癌代谢途径阻遏因子，通过多重机制特异性地调节组织细胞致癌代谢过程；还原型萝卜硫素能够高效诱导醌氧化还原酶的表达，加速细胞中致癌物质的代谢排出过程，从而具有化学预防癌症的功效；还原型萝卜硫素具有抑制幽门螺杆菌生长增殖和小鼠胃炎的活性，并能够通过抑制和消除幽门螺杆菌感染，来预防幽门螺杆菌感染引起的胃癌。还原型萝卜硫素是萝卜中发现的抗癌活性最强的植物化学组分，对乳腺癌、肺癌、前列腺癌以及肠癌等多种癌症都具有很强的抑制功效。但还原型萝卜硫素稳定性极差，易降解，且易与含巯基的化合物反应而失去抗癌活性，而其前体物质还原型萝卜硫苷化学性质稳定，不易降解，并在人体摄入后，可在肠道微生物的作用下转化生成具有高效抗癌活性的还原型萝卜硫素，因此，还原型萝卜硫苷可作为抗癌和防癌天然活性成分，添加至食品、功能性食品、保健品和药品中。目前，国际上可供出售的硫代葡萄糖苷高纯品(纯度≥98％)主要有4-甲基亚磺酰基-3-丁基硫代葡萄糖苷、4-甲硫基-3-丁基硫代葡萄糖苷、4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷和烯丙基硫代葡萄糖苷，均由美国和德国公司提供，且价格昂贵，而具有高效抗癌和防癌效果的还原型萝卜硫苷高纯品尚无公司销售。

发明内容

本发明针对目前还原型萝卜硫苷依赖国外进口，价格昂贵、工艺技术复杂的缺点，提供了一种以萝卜为原材料制备高纯度还原型萝卜硫苷的方法，该方法可高效率的制备高纯度的还原型萝卜硫苷，大大降低了生产成本，实现了还原型萝卜硫苷高纯品的工业化生产。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

一种以萝卜为原材料制备高纯度还原型萝卜硫苷的方法，是由以下步骤制备得到的：

(1)将萝卜原材料干燥，粉碎，得萝卜原材料粉末；