[发明专利]表达载体及重组细胞

说明书

本发明提供了一种表达载体，其是IDS基因过表达慢病毒质粒表达载体，包括EF1α‑IDS序列。该表达载体以EF1α为启动子，能够保证真核基因高效表达，为研究IDS基因的功能提供了良好的工具。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体地，本发明涉及一种表达载体以及包括该表达载体的重组细胞，特别地，本发明尤其涉及IDS基因过表达慢病毒质粒表达载体。

背景技术

慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的基因的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，使用慢病毒载体，能大大提高目的基因的转导效率，且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，能够比较方便快捷地实现目的基因的长期、稳定表达。在体外实验及体内实验的研究中，慢病毒已经成为表达外源基因的常用载体形式之一，并且正在获得越来越广泛的应用。在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

粘多糖贮积症II型(Mucopo1ysaccharidosis type II，MPS II，MIM309900)，又称Hunter综合征，是一种X连锁隐性遗传病，在人群中的发病率极低，属于一种“罕见病”。由于基因突变导致溶酶体酶艾杜糖-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulfatase，IDS)缺乏，以致粘多糖(mucop01ysaccharides，MPS)在体内大量沉积，尿中大量排出硫酸皮肤素(dermatinsulfate B，DS)、硫酸已酰肝素(heparitin sulfate，HS)。患者出生时表现一般正常，但随着越来越多的粘多糖贮积在体内，MPS II病程进行性加重，症状典型，预后甚差。IDS基因定位于Xq27.3-Xq28，MPS II与IDS基因发生突变高度相关。因此，开发一种可携带IDS基因的慢病毒载体，对于研究IDS基因的功能提供了良好的工具，且为Hunter综合征的慢病毒基因治疗提供了一种较为理想的手段，具有重要的现实意义。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明提供了一种可携带IDS基因的慢病毒表达载体以及包括该表达载体的重组细胞。

一方面，本发明提供了一种表达载体，所述表达载体包括EF1α-IDS序列。

前述的表达载体，所述EF1α-IDS序列包括：强启动子EF1α或者其功能片段或序列变体；IDS基因；和增强子Kozak或者其功能片段或序列变体；

其中，增强子Kozak或者其功能片段或序列变体插入到强启动子EF1α或者其功能片段或序列变体与IDS基因之间。

前述的表达载体，所述EF1α-IDS序列包括：强启动子EF1α，IDS基因，和插入到强启动子EF1α与IDS基因之间的增强子Kozak。

前述的表达载体，所述增强子Kozak的序列是CGCCACC。

前述的表达载体，所述EF1α-IDS序列是SEQ ID No:1所示的序列。

前述的表达载体，所述表达载体以慢病毒载体pRRLSIN.cPPT.PGK-GFP.WPRE为骨架载体，将PGK-GFP序列替换为EF1α-IDS序列。

另一方面，本发明还提供了包括上述表达载体的重组细胞。

相比于现有技术，本发明的技术方案至少具有如下有益效果：

(1)本发明提供了一种IDS基因过表达慢病毒质粒表达载体，为研究IDS基因的功能提供了良好的工具。

(2)本发明所述的启动子EF1α，是一种强表达的启动子，可使外源基因在哺乳动物细胞中广泛表达，甚至可在原代细胞和干细胞内表达。