[发明专利]细胞浆定位的CD133作为肝癌预后标志物的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及CD133作为肝癌预后标志物的用途，具体涉及CD133的亚细胞结构定位作为肝癌预后标志物的用途，尤其是细胞浆定位的CD133作为肝癌预后标志物及其在制备肝癌的预后诊断的试剂或试剂盒中的用途。

背景技术

肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，据WHO统计，肝癌每年的死亡人数达74.5万人，在癌症中死亡率排第二，仅次于肺癌，并且肝癌的发病率还呈逐年上升的趋势。研究显示，肝癌主要分为起源于肝细胞的癌症和由其他组织的癌细胞扩散到肝脏的转移性肝癌，据统计，约90％的肝癌为肝细胞癌，通常肝癌术语所指的是肝细胞癌。

肝癌的预后是指预见患有肝癌的病人的各种情况，如经治疗后从肝癌疾患中全面康复的可能性，经治疗后复发和转移的可能性，研究显示，肝癌患者的预后与诊断时间、疾病严重程度、治疗方案等各种情况具有相关性。业内认为，对肝癌病人疾病的恶性程度和预后较为准确的判断有利于实施相对个性化的治疗方案，如评估为良好预后的患者，可以避免采用将可能引起严重副作用的危险的干预治疗方法，另一方面，对于被评估为较差预后的患者，拟建议采用积极的化疗或手术干预以增加患者的生存期，等等。因此，肝癌患者预后判断的相关标志物的发现则显得非常重要。

资料公开了CD133是具有五次跨膜结构的糖蛋白，通常定位于细胞表面。肿瘤中以CD133分子作为细胞表面标记物的分选证明，CD133表达的细胞具有肿瘤干细胞特点；肿瘤干细胞能够通过自我更新维持自身群体稳定，通过逐步分化和增殖产生具备不同功能的肿瘤细胞并促进肿瘤的形成。研究表明，CD133表达细胞有更强的自我更新能力、成瘤能力、放化疗抵抗能力和迁移能力等，CD133可作为肝癌等多种实体瘤的肿瘤干细胞标志蛋白。有文献报道，CD133高表达的肝癌患者总的生存期和无病生存期均明显比CD133低表达的肝癌患者短(Stephanie Ma等，miR-130b Promotes CD133⁺Liver Tumor-Initiating Cell Growth and Self-Renewal via Tumor Protein 53-Induced Nuclear Protein 1：Cell Stem Cell，Volume 7，Issue 6，3December 2010，Pages 694-707)。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟提供CD133的亚细胞结构定位与肝癌的预后的相关性以及作为肝癌预后标志物在用于制备肝癌的预后诊断的试剂或试剂盒中的用途。

发明内容

本发明的目的在于提供CD133蛋白的新用途，具体涉及CD133的亚细胞结构定位作为肝癌预后标志物的用途，尤其是细胞浆定位的CD133作为肝癌预后标志物及其在制备肝癌的预后诊断的试剂或试剂盒中的用途。

本发明通过免疫组织化学芯片，对多例肝癌组织进行免疫组织化学抗CD133蛋白染色，证实了CD133蛋白存在亚细胞定位的改变-由细胞膜转位到细胞浆；

本发明进一步采用细胞浆表达CD133的肝癌细胞系Huh7试验证实，所述CD133表达具有促进肝癌细胞增殖和自我更新的能力；

本发明的实验结果显示，在CD133表达的肝癌患者当中，CD133的亚细胞结构定位与患者的预后相关，具有细胞浆定位表达CD133的患者预后比细胞膜定位表达CD133的患者预后更差，且CD133的表达促进了肝癌细胞的增殖和自我更新，表明CD133定位到细胞浆的肝癌患者恶性程度更高；实验结果证实，细胞浆定位的CD133可作为肝癌预后的诊断标志物。

本发明的进一步目的是提供CD133蛋白的细胞浆定位在制备肿瘤预后的临床诊断的试剂或试剂盒的应用，通过检测CD133蛋白的亚细胞结构定位诊断肝癌患者的预后。

本发明中，所述的细胞浆定位的CD133蛋白的肿瘤预后诊断试剂或试剂盒是以能够鉴定CD133蛋白的亚细胞结构定位的实验技术结合抗CD133抗体的检测方法，建立起检测CD133蛋白亚细胞结构定位的方法及配套的试剂或试剂盒。

所述的鉴定CD133蛋白的亚细胞结构定位的实验技术，可以是肝癌组织切片免疫组化CD133抗体染色、肝癌组织切片免疫荧光CD133抗体染色、能分离肝癌组织中细胞膜和细胞浆组分并用CD133抗体检测的实验方法等。

所述的针对CD133蛋白的抗体为常规的抗体制备方法所制备，抗CD133蛋白抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。