[发明专利]识别人乙型肝炎病毒X蛋白的单克隆抗体及用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药和基因工程领域，具体涉及一种可特异性识别人乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBx)的单克隆抗体及其在HBV感染与相关疾病如肝细胞癌(HCC)的诊断和治疗中的应用。

背景技术

现有技术公开了由HBV感染引起的乙型肝炎以肝脏炎性病变为主，并可并发多器官损害。HBV感染慢性化为慢性乙型肝炎(CHB)后，还可引发肝纤维化、肝硬化、原发性肝细胞癌(HCC)和肝衰竭，导致死亡。近年来，随着HBV疫苗的成熟和预防接种的推广，新发HBV感染率显著下降，但全球仍然有3.5亿左右HBV慢性携带者，每年约1百万患者死于HBV感染相关疾病(Lavanchy 2004)。中国属HBV感染高发区，约有1.2亿慢性携带者和3000万慢性乙型肝炎患者(Liu，Si et al.2002)。

乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)由HBV的X基因编码，包括154个氨基酸残基(Tiollais，Pourcel et al.1985)。已知的8种HBV基因型(A型-H型)均编码相同长度的HBx蛋白，不同基因型HBx之间的氨基酸序列同源性可低至70％左右。培养细胞中的研究表明，HBx在细胞内易发生降解，半衰期约30分钟左右，因此通常在细胞内以较低水平存在(Schek，Bartenschlager et al.1991)。

已有研究表明HBx是HBV诱发肝癌的重要因素之一。HBx不仅存在于HBV相关HCC病人的肿瘤组织中，也存在于非肿瘤组织中(Moriarty，Alexander et al.1985；Wang，London et al.1991；Diamantis，McGandy et al.1992)。对HBV感染患者肝脏和血清中HBx蛋白或相应抗体进行连续检测，对于研究急/慢性HBV感染患者的病程进展，特别是HBV相关HCC的早期发现、发展观察和疗效评价，具有现实的临床意义。此外，由于HBx仅在HBV感染细胞中表达，且不具备分泌信号肽，故通常情况基本不进入患者血液。因此，HBx同时也是靶向性治疗慢性乙型肝炎和HBV相关HCC的重要靶标分子。

针对HBx的基础和临床研究与应用需要具有高特异性和广泛反应性的HBx单克隆抗体，在此基础上可开发HBx蛋白及抗体的检测系统、针对表达HBx细胞的靶向性工具等诊断和治疗工具，并进而通过人源化、单链化等分子改造得到药学性质更为优良的抗体分子。

发明内容

本发明的目的是提供能够特异性识别HBx蛋白的单克隆抗体，包括其轻链和重链可变区及互补决定区的氨基酸序列和核苷酸序列，为构建性质更优的人源化抗体、单链抗体等基因工程抗体提供支持。

本发明的另一目的是提供检测HBx蛋白及其相应抗体的方法。

本发明通过以下技术方案实现：

能够识别HBx蛋白的单克隆抗体，包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区中的3个互补决定区(CDR)氨基酸序列分别为：

CDR1：Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met；

CDR2：Trp Trp Asp Asp Asp；

CDR3：Met Pro Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Gly Val Ala Tyr；

所述轻链可变区中的3个CDR氨基酸序列分别为：

CDR1：Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met Tyr；

CDR2：Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser；

CDR3：Gln His Ser Arg Glu Leu Pro Leu Thr。

所述的HBx蛋白单克隆抗体，编码重链可变区的基因序列如SEQ ID NO.1所示，编码轻链可变区的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

所述的HBx蛋白单克隆抗体，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，轻链可变区序列氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

本发明还提供了一种杂交瘤细胞株，命名为杂交瘤细胞株Anti-HBx KY02，于2016年4月28日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO：C201641，所述细胞株能够分泌产生所述的HBx蛋白单克隆抗体。