[发明专利]吡咯伯克霍尔德氏菌的应用及其降解邻苯二甲酸2‑乙基己酯的方法

说明书

技术领域

本发明涉及吡咯伯克霍尔德氏菌的应用及其降解邻苯二甲酸2-乙基己酯的方法，属于环境微生物应用领域。

背景技术

邻苯二甲酸2-乙基己酯（Bison（2-ethylhexyl）ortho-phthalate），简称DEHP，是一类重要的环境激素类有机合成化合物，在工业生产中主要用作聚氯乙烯( PVC) 塑料增塑剂，提高塑料的可塑性和易弯曲性。

塑料中，DEHP与塑料分子以氢键或范德华力连接，很容易通过淋洗、迁移或蒸发等方式进入食物、空气、饮用水及其它物质中；DEHP也可以在塑料生产或燃烧过程中通过烟尘沉降释放到环境中。许多动物实验研究结果显示DEHP具有生殖发育毒性、免疫 毒性、胚胎毒性、肝脏毒性及致癌性等多种毒性，并具有引起甲状腺素代谢改变的类雌激素活性。美国环保局（EPA）、欧盟以及中国国家环境监测中心均已将其列入优先控制污染物黑名单。

环境中DEHP的分解、转化方法及技术探索已成为环境污染治理的重要研究方向。但是DEHP在自然环境中的水解、光解速度非常缓慢，属于难降解物质。有研究表明，DEHP的水解半衰期达2000年，光解半衰期也需要105年。与水解及光解等物理降解相比，基于微生物代谢的生物降解过程具有功能微生物多样性、过程简单、成本低、环境友好等特点，使得微生物降解被认为是自然环境中DEHP完全矿化的最有效途径。因此，筛选高效分解DEHP的微生物并阐明其分解代谢途径，对于深化有关消除DEHP环境危害的研究及应用具有现实意义。

近年来，DEHP的微生物降解已经得到广泛的研究，大量能高效降解DEHP的菌株已经从各类环境中分离得到，包括红树林、土壤、海洋、河流与废水处理厂的活性污泥等，微生物类别包括大量细菌以及部分真菌。研究表明，不同来源以及不同类型的微生物在DEHP降解途径方面具有较大差异性，所呈现的降解机制也不尽相同。所述降解机制包括发挥降解作用的关键酶及酶系、降解途径中的关键节点及关键影响因素、微生物自身代谢与降解效果之间的关系、微生物降解广谱性与特异性及其与DEHP结构的关系等。

吡咯伯克霍尔德氏菌（Burkholderia pyrrocinia），其应用主要在促进植物生长和植物病害的生物防治；目前未见有关利用吡咯伯克霍尔德氏菌降解DEHP的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够降解邻苯二甲酸2-乙基己酯的新菌株；及该菌株的应用和采用该菌株降解邻苯二甲酸2-乙基己酯的方法。

技术方案

本发明从土壤中筛选并分离出了一株新的菌株；是杆状的革兰氏阴性菌，且不能形成芽孢；经鉴定，该菌株是一种吡咯伯克霍尔德氏菌（Burkholderia pyrrocinia）；命名为吡咯伯克霍尔德氏菌B1213；保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；保藏编号为CGMCCNo.12806；保藏时间为2016年7月21日。

本发明的吡咯伯克霍尔德氏菌B1213能够降解邻苯二甲酸2-乙基己酯；吡咯伯克霍尔德氏菌B1213对邻苯二甲酸2-乙基己酯的降解率可高达55.66-73.49%。

采用本发明的吡咯伯克霍尔德氏菌B1213降解邻苯二甲酸2-乙基己酯的其中一种方法为：在酵母提取物存在的条件下，吡咯伯克霍尔德氏菌B1213与DEHP接触。其中，酵母提取物的量会影响降解率。所以，上述方法，优选的，在改良BSM 基础盐液体培养基存在的条件下，吡咯伯克霍尔德氏菌B1213与DEHP接触；所述改良BSM 基础盐液体培养基，每1L中含有以下成分：酵母提取物2-10g，硫酸铵0.5g，氯化钠4.0g，三水合磷酸钾0.5g，七水合硫酸镁0.4g，蒸馏水余量；pH7.0。

具体的，是将DEHP 加入改良BSM 基础盐液体培养基；将吡咯伯克霍尔德氏菌B1213种子液接种于改良BSM 基础盐液体培养基，在150-200 rpm、30-35℃的条件下恒温震荡培养。

上述方法，优选的，改良BSM 基础盐液体培养基中酵母提取物的含量为7g/L。

上述方法，优选的，培养条件为转速175rpm，温度30℃，其他条件相同情况下，此条件下菌B1213的降解率最高。

上述方法，吡咯伯克霍尔德氏菌B1213种子液相对于改良BSM 基础盐液体培养基的接种量的变化，对单位时间内的DEHP降解率有明显影响；通常情况下，接种量越多，单位时间内降解率越高；但是对最终降解率（发酵液中DEHP含量达到稳定时的降解率）没有明显影响。