[发明专利]一种烟草HKT1基因及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种烟草HKT1基因在促进烟草植株钾离子吸收和转运方面的应用，其特征在于，将所述的烟草HKT1基因转入到烟草植株中，使HKT1基因超量表达以提高烟草植株的烟叶中钾离子的含量，所述HKT1基因的核苷酸序列如Seq ID No.1所示。

2.权利要求1所述的烟草HKT1基因的应用，其特征在于，所述HKT1基因的制备方法包括以下步骤：

设计PCR扩增引物，所述的PCR扩增引物包括正向引物和反向引物，所述的正向引物的核苷酸序列为：5’-ATGATCCTTTCATTGTTAGG-3’，所述的反向引物的核苷酸序列为5’-TTATAATACTTTCCAGCCC-3’；

提取烟草细胞总RNA；

合成烟草细胞cDNA；

以所述烟草细胞cDNA为模板进行HKT1基因的PCR扩增，得到目的片段，测序后得到HKT1基因。

3.根据权利要求2所述的烟草HKT1基因的应用，其特征在于，所述PCR扩增引物的设计是以NCBI Reference Sequence:XM_009601690.1为参考序列，使用软件primer 5设计得到的，所述XM_009601690.1的核苷酸序列如Seq ID No.2所示。

4.根据权利要求2所述的烟草HKT1基因的应用，其特征在于，所述的PCR扩增的体系为20μL体系，包括Premix ExTaq 10μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，烟草细胞cDNA 1μL，ddH₂O 8μL。

5.根据权利要求2或4所述的烟草HKT1基因的应用，其特征在于，所述的PCR扩增的反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s；55℃退火30s；72℃延伸2min；35个循环。

6.根据权利要求2所述的烟草HKT1基因的应用，其特征在于，所述的目的片段在测序之前还包括：将所述目的片段导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中进行菌落PCR验证，验证为阳性克隆后进行测序。

7.根据权利要求6所述的烟草HKT1基因的应用，其特征在于，所述菌落PCR验证的体系为10μL，包括Premix ExTaq 5μL，10μM的上游引物0.5μL，10μM的下游引物0.5μL，ddH₂O 4μL。

8.根据权利要求7所述的烟草HKT1基因的应用，其特征在于，所述上游引物的核苷酸序列为：5’-ATGATCCTTTCATTGTTAGG-3’，所述下游引物的核苷酸序列为：5’-TTATAATACTTTCCAGCCC-3’。