[发明专利]真菌的检测方法及检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及生物检测技术领域，特别涉及一种真菌的快速检测方法及检测试剂盒。

背景技术

真菌性感染主要是外源性感染，浅部真菌有亲嗜表皮角质特性，侵犯皮肤、指甲及须发等组织，顽强繁殖，发生机械刺激损害，同时产生酶及酸等代谢产物，引起炎症反应和细胞病变。深部真菌，可侵犯皮下，内脏及脑膜等处，引起慢性肉芽肿及坏死。条件性真菌感染主要是内源性感染(如白色念珠菌)，亦有外源性感染(如曲霉菌)，此类感染与机体抵抗力，免疫力降低及菌落失调有关，常发生于长期应用抗生素、激素、免疫抑制剂、化疗和放疗的患者。近年来，原发性和继发性侵袭性真菌感染(invasive fungal infections，IFI)的患病率持续上升。IFI作为院内感染在恶性肿瘤患者、接受化疗的血液病患者、AIDS患者、器官移植患者和接受抑制免疫力治疗的患者中十分常见，致使越来越多的患者产生严重的并发症甚至死亡。过敏性真菌病系在各种过敏性或变态反性疾病中，由真菌性过敏原(如孢子抗原)引起过敏症，如哮喘，变态反应性肺泡炎和癣菌疹等。目前临床上针对真菌感染的检测手段主要有一下几种：

(一)直接检查

是最简单而重要方法，浅部感染真菌的病变标本如毛发、皮屑、甲屑置玻片上，滴加10％KOH，覆盖玻片微热熔化角质层，再将玻片压紧，用吸水纸吸去周围多余碱液，在显微镜下观察，见皮屑甲屑中有菌丝，或毛发内部或外部有成串孢子，即可初步诊断为癣菌感染，但不能确定菌种。深部感染真菌标本如痰，脑脊液亦可做涂片用革兰氏染色(白色念珠菌)或愚汁负染色(隐球菌)观察形态特征。

(二)培养检查

本法可确定菌种，辅助直接检查不足，通常用沙保氏培养基(22～28℃)，深部真菌可用血琼脂或脑心葡萄糖血琼脂37℃培养，或根据不同菌种运用不同培养基，如孢子丝菌可用胱氨酸血液葡萄糖琼脂，必要时运用鉴别培养基和生化反应，同化试验等进行鉴定。

(三)免疫学试验

近年来有许多方法用于检测深部感染真菌的抗体，作辅助诊断荚膜组织胞浆菌、念珠菌、曲霉菌。但系统性感染患者常因免疫功能降低不出现抗体；而且许多真菌间抗原性有交叉反应；有的产生抗体后维护时间较长，正常人群中有一定比例的阳性率，则必须结合临床情况分析结果才能作出恰当的诊断。

(四)动物试验

其些真菌对实验动物有致病性，如皮炎芽生菌，球孢子菌可在小白鼠，豚鼠体内生长，白色念珠接种家兔小白鼠可发生肾脏脓肿致死。

(五)G试验

G试验检测的是真菌的细胞壁成分——1，3-β-D-葡聚糖，人体的吞噬细胞吞噬真菌后，能持续释放该物质，使血液及体液中含量增高(浅部真菌感染无类似现象)。1-3-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎(Limulus)变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。

G试验是目前真菌检测的金标准；但是G试验依赖国家二级保护动物——鲎的血清，并且，操作繁琐，人为干扰因素较多，大规模应用存在缺陷。

综上所述，上述这些方法总是存在一些问题，有的是因为检测时间过长，不利于及时诊断和治疗；有的则是因为敏感度不高，假阴性率高，错过了真菌感染及早发现及早治疗的时机。

目前针对1，3-β-D-葡聚糖的检测是新兴的灵敏度较高特异性较好的的检测真菌感染的方法。1，3-β-D-葡聚糖是酵母和丝状真菌细胞壁的多聚糖成分，而原核生物、病毒和人体细胞都不存在这种多聚糖，当真菌进入人体血液或深部组织后，经中性粒细胞及吞噬细胞的处理，1，3-β-D-葡聚糖可从真菌细胞壁释放出来进入血液及其他体液中，在浅部真菌感染中，1，3-β-D-葡聚糖未被释放出来，故在体液中的量不增高。因此，1，3-β-D-葡聚糖在血液及无菌体液中的含量成为侵袭性真菌感染诊断标准。当前市场上有几例针对1，3-β-D-葡聚糖的检测的试剂盒，灵敏度不错，但是因为是基于凝胶法、比浊法等原理，导致整个检测过程比价漫长，检测费用也比较高。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种真菌的检测方法，种真菌检测方法，该方法包括：用标记物标记1，3-β-D-葡聚糖的多肽或其抗体二者中任意一个，先将未做标记的1，3-β-D-葡聚糖的多肽或其抗体结合到固相载体上，然后将待检样品加入到固相载体上，再加入已做标记的1，3-β-D-葡聚糖的多肽或其抗体，通过检测标记物方法来检测待检样品中是否存在真菌。