[发明专利]双特异性抗体FITC×CD3及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了双特异性抗体FITC×CD3及其制备方法和应用，属于生物制药和免疫学领域。本发明的双特异性抗体FITC×CD3靶向的免疫细胞抗原为CD3，靶向的靶抗原为荧光素FITC。双特异性抗体FITC×CD3与FITC修饰后的抗体结合后，可以将淋巴T细胞靶向到肿瘤细胞，对肿瘤细胞起到杀伤作用。与抗体单独使用相比，本发明的抗体可以增强药效，促进机体对肿瘤细胞的免疫反应。通过将双特异性抗体FITC×CD3与不同的FITC修饰的抗体组合，得到的双特异性抗体可以靶向多种肿瘤细胞。本发明的抗体是利用细胞工程技术和基因工程技术制备的生物大分子治疗药物，具有特异性高、性质均一、可针对特定靶点定向制备等优点。

技术领域

本发明属于生物制药和免疫学技术领域，更具体地说，涉及一种双特异性抗体FITC×CD3及其制备方法和应用。

背景技术

双特异性抗体是含有两种抗原结合位点的基因工程抗体，能在靶细胞和功能细胞之间架起桥梁，产生特异性的效应功能。在生物医学中，特别是在肿瘤的免疫治疗中具有十分广阔的应用。通过双特异性抗体介导细胞毒作用杀死肿瘤细胞是当前免疫治疗应用研究的热点，其主要特征是双特异性抗体能同时结合肿瘤细胞表面特定的抗原和免疫效应细胞上的靶抗原，直接激发免疫效应细胞对肿瘤细胞的特异性杀伤作用。然而，在双特异性抗体药物研发过程中，普遍存在着原核表达困难、产量低、纯化步骤繁琐、稳定性差等障碍。

关于双特异性抗体的研究一直有报道，例如，中国专利申请号为201210564978.1，申请公布日为2013年5月8日的专利申请文件公开了一种用于前列腺癌早期诊断和治疗的抗PSMA/FITC双特异性抗体及其制备方法，该抗体分子量小，对肿瘤组织的穿透力较强，特别是针对前列腺组织具有较厚的前列腺包膜的解剖特点，小分子抗体更容易到达病变部位。中国专利申请号为201510029971.3，申请公布日为2015年5月6日的专利申请文件公开了一种双特异性抗体EpCAM×CD3的构建及应用，该发明的双特异性抗体由单链单元和单价单元组成，其中该单价单元针对免疫细胞的表面抗原CD3具有特异性结合能力，该单链单元针对肿瘤细胞表面抗原EpCAM具有特异性结合能力；该单链单元包含与Fc片段融合的单链可变片段(ScFv)，该单价单元包含轻链和重链对。

在免疫学中，CD3蛋白是淋巴T细胞的共受体，是一种蛋白质复合物，此复合体具有活化T细胞，稳定淋巴T细胞表面受体(TCR)结构的功能。CD3分子的功能是转导TCR识别抗原所产生的活化信号。FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。FITC分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长为520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC能与各种抗体蛋白结合，主要用于荧光抗体技术中的荧光染料，结合后的抗体不丧失与抗原结合的特异性，并在碱性溶液中仍有强烈绿色荧光。肿瘤的治疗是目前双特异性抗体应用最为广泛的领域。大量的可以与肿瘤细胞特异性结合的抗体、多肽可以被FITC修饰。

发明内容

1.要解决的问题

针对现有的双特异性抗体存在原核表达困难、产量低、纯化步骤繁琐、稳定性差等问题，本发明提供一种双特异性抗体FITC×CD3及其制备方法和应用。本发明的双特异性抗体FITC×CD3靶向的免疫细胞抗原为CD3，靶向的靶抗原为荧光素FITC。本发明的双特异性抗体与FITC修饰后的抗体结合后，可以将淋巴T细胞靶向到肿瘤细胞，对肿瘤细胞起到杀伤作用。与抗体单独使用相比，本发明的抗体可以增强药效，促进机体对肿瘤细胞的免疫反应。通过将本发明的抗体与不同的FITC修饰的抗体组合，得到的双特异性抗体可以靶向多种肿瘤细胞。本发明的抗体是利用细胞工程技术和基因工程技术制备的生物大分子药物，具有特异性高、性质均一、可针对特定靶点定向制备等优点。

2.技术方案

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：