[发明专利]参芪降糖制剂含量测定方法及其在整体质量控制中的应用

说明书

本发明提供了一种参芪降糖制剂含量测定方法，所述方法测定的是参芪降糖制剂中10个活性成分的含量：人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、黄芪甲苷、五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙；本发明以化合物降糖活性为导向检测复方中的多种活性物质，能够更好的反应整个复方制剂的质量水平；同时，选取Q‑MS离子监测模式进行含量测定，质谱定量准确性高、专属性强、灵敏度高，优于传统HPLC分析方法；根据本发明方法得到的不同批次参芪降糖制剂液相图构建了指纹图谱，进行相似度评价，更科学全面的评价参芪降糖制剂产品的内在质量，为建立更高水平的质量标准提供依据。

(一)技术领域

本发明属于药物质量控制领域，具体涉及高效液相色谱-单四级杆质谱联用技术(HPLC-Q-MS)对参芪降糖制剂多成分含量测定的方法，以及对由此法得到的参芪降糖制剂液相图构建指纹图谱，还涉及此法在在参芪降糖制剂整体质量控制中的应用。

(二)背景技术

糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)属于中医“消渴病”范畴：“渴而饮水多，小便数，无脂似麸片甜者，皆是消渴病也”。国际糖尿病联盟(IDF)指出，目前全球有4.15亿糖尿病成年患者，3.18亿人存在患糖尿病风险，其中，II型糖尿病占全球所有糖尿病病例的90％，因糖尿病伴发的高血糖，易导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍等并发症，大大降低了糖尿病患者的生活质量。

目前，临床上糖尿病的治疗除注射胰岛素外主要口服磺脲类和双胍类降糖药物，但西药在有效降低血糖的同时也存在众多的安全性问题和不良反应，如严重的低血糖、乳酸性酸中毒、胃肠道反应及肝损伤、永久性神经功能损伤、头痛、头晕甚至死亡等。近年来研究发现，中药的降血糖作用温和持久，疗效稳定，副作用小，恰好弥补了化药的不足，日益受到国内外内分泌界的高度重视。

参芪降糖颗粒(Shenqi Jiangtang Granule，SJG)，由11味传统中药材组成，纯中药复方制剂，属于国家四类新药，也是国家二级中药保护品种，在临床上主要适用于II型糖尿病气阴两虚证患者，临床数据显示效果良好。方中人参为扶阳益阴之良品，黄芪为补气升阳之要药，两者共为君药；臣以生地、麦冬、天花粉生津润燥而止渴；佐以枸杞子、五味子、覆盆子封固肾关；使以山药、茯苓、泽泻三焦并理。据文献报道：人参中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1均有降糖活性，2015版中国药典规定人参茎叶总皂苷的质量控制指标成分是人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1；黄芪中黄芪甲苷、刺芒柄花素、毛蕊异黄酮均有降糖活性，2015版中国药典规定黄芪药材的质量控制指标成分是黄芪甲苷；现代药理学研究亦证明生地中的低聚糖、梓醇、地黄苷D均有降糖效果；五味子醇甲是中国药典中规定的检测五味子药材的指标性成分；麦冬、天花粉、枸杞子、山药、茯苓发挥降糖效果的主要是多糖类物质或凝集素类化合物。

美国糖尿病协会提倡，糖尿病治疗的目标是把血糖降至正常水平或接近正常水平，同时减少并发症的发生，参芪降糖颗粒多成分、多靶点的作用特点更适于糖尿病的治疗。查阅国内外相关文献发现，目前，已报道的对参芪降糖颗粒的质量控制主要是：通过薄层鉴别了人参皂苷和黄芪皂苷，并用5％香草醛-冰乙酸法测定人参总皂苷和黄芪总皂苷的含量；利用HPLC法测定了参芪降糖颗粒中人参皂苷Re和Rg1的含量。以上方法大多只是对参芪降糖制剂中的一种或两种成分进行定性定量分析，不能反映整个复方制剂的质量水平，且各有不足，比如：选择性差、灵敏度低、试剂污染环境等。HPLC-Q-MS联用已成为复杂体系分离分析以及化合物结构鉴定的良好平台，但迄今未见使用此技术对参芪降糖制剂中的多类活性成分同时进行分析的文献报道，更重要的是，HPLC-Q-MS的高灵敏度、高选择性和高分辨率能够弥补传统HPLC的不足，并可以对复杂的中药复方制剂的多类成分进行同时测定。

(三)发明内容