[发明专利]一种人源T淋巴细胞的培养基及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种人源T淋巴细胞的培养基，其特征在于，每1L所述培养基中包括如下含量的各组分：

人AB血清80-120mL，MEM维生素溶液7-15mL，N-乙酰基-L-半胱氨酸7-12mM，谷氨酰胺或其衍生物1.6-2.5mM，丙酮酸钠0.8-1.2mM，4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠15-25mM，IL-7 4-6μg，IL-15或其异二聚体6-9μg，余量为X-VIVO基本培养基；其中，所述谷氨酰胺或其衍生物包括谷氨酰胺或L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。

2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述IL-15或其异二聚体与所述IL-7的质量比为(1-2.25)：1。

3.如权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，每1L所述培养基中包括7-8μg的IL-15异二聚体。

4.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，每1L所述培养基中包括人AB血清90-110mL。

5.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，每1L所述培养基中包括如下含量的各组分：

人AB血清90-110mL，MEM维生素溶液8-12mL，N-乙酰基-L-半胱氨酸9-11mM，谷氨酰胺或其衍生物1.8-2.2mM，丙酮酸钠0.9-1.1mM，4-羟乙基哌嗪乙磺酸18-22mM，IL-7 4.5-5.5μg，IL-15或其异二聚体7-8μg，余量为X-VIVO基本培养基；所述培养基的pH值为7.0-7.2。

6.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，每1L所述培养基中还包括如下含量的各组分：叠氮胸苷0.8-1.2μM，利托那韦450-550nM。

7.一种如权利要求1所述的人源T淋巴细胞的培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

按所述培养基的配方取人AB血清、MEM维生素溶液、N-乙酰基-L-半胱氨酸、谷氨酰胺或其衍生物、丙酮酸钠、4-羟乙基哌嗪乙磺酸钠、IL-7、IL-15或其异二聚体，加入X-VIVO基本培养基定容至1L，混合均匀，经过滤后得到人源T淋巴细胞的培养基；其中，所述谷氨酰胺或其衍生物包括谷氨酰胺或L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。

8.如权利要求1-6任一项所述的培养基在培养人源T淋巴细胞中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用具体为培养抗原特异性T淋巴细胞，包括以下步骤：

提供抗原特异性T淋巴细胞；

取上述抗原特异性T淋巴细胞，采用所述人源T淋巴细胞培养基进行高效扩增培养7-10天，在所述高效扩增培养过程中，调整细胞的浓度为(0.5-1)×10⁶个/mL，得到扩增后的抗原特异性T淋巴细胞。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗原特异性T淋巴细胞是采用以下方法制备：

(1)取分离出的人外周血单个核细胞，加入X-VIVO基础培养基，配制成第一细胞悬浮液，加入免疫磁珠，室温孵育1-3小时后，经磁性分离，得到磁珠分选后的人源T淋巴细胞；

(2)取上述磁珠分选后的人源T淋巴细胞，加入所述人源T淋巴细胞培养基，配制成第二细胞悬浮液，培养1-2天后换液，加入表达特定抗原的病毒，再加入上述人源T淋巴细胞培养基，调整外周血单个核细胞的细胞浓度为(0.5-1)×10⁶个/mL，接种，得到抗原特异性T淋巴细胞。