[发明专利]一种耐热细胞溶解素及其在烟草薄片制备工艺中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞溶解素，特别涉及一种耐热细胞溶解素及其在烟草薄片制备工艺中的应用。

背景技术

烟草薄片又称重组烟叶、均质烟叶。主要由烟末、碎片、烟梗或低次烟叶加入胶粘剂和其他添加剂等组成。烟草薄片可作为烟制品原料，用来代替天然的雪茄内包叶，现已广泛用作卷烟原料。烟草薄片的制备方法主要有造纸法、稠浆法和辊压法3种。其中，造纸法的应用最为广泛。造纸法是将烟草原料先用水浸提，不溶性物质打浆、抄造制成基片，浸提液浓缩涂布至基片上，再干燥即得。由于在造纸法制备烟草薄片过程中，直接将浓缩后的萃取液直接浸涂或喷涂到薄片片基上，浓缩后的萃取液中的大分子化合物，如蛋白质、淀粉等化学成份，在制备过程中几乎不发生变化，且烟草废弃料具有先天性缺陷，如缺少卷烟特征香气、烟草香气淡、杂气、木质气较重、喉部干燥感和舌部刺辣感明显等，因此将这些原料加入卷烟配方后会显著降低卷烟等级。

国内目前主要通过在烟草物料萃取过程中酶解或在浓缩液中加料加香来改善烟草薄片吃味差等缺点。酶解主要是利用降解酶对烟草原料中的大分子物质进行降解。但是由于烟草浸提过程中的高温工艺影响了降解酶的活性，因此再造烟叶浸提液过程中，普通的降解酶几乎难以发挥其原有的活性功能。但是由于高温降解酶的成本较高，且烟草原料中大分子物质的种类较多，因此采用多种耐高温降解酶辅助烟草萃取时，存在操作繁琐、成本较高，降解效果不理想的问题。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种耐热细胞溶解素及其在烟草薄片制备工艺中的应用，该耐热细胞溶解素能够有效降低浸提液中的蛋白质含量，提高可溶性总糖含量，并降低制备成型的烟草薄片的木质素含量。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种耐热细胞溶解素，将耐热细胞溶解素基因克隆到大肠杆菌中，再通过蓝白斑筛选含有该耐热细胞溶解素基因的阳性克隆子，最后对阳性克隆子进行诱导表达，即得。

所述的耐热细胞溶解素基因为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

一种利用耐热细胞溶解素制备烟草薄片的方法，包括以下步骤：

(1)在烟草原料中加入水和含有耐热细胞溶解素的溶液，在55-75℃条件下浸提1-2h，过滤，得到一级浸提液和一级烟草固体物；

(2)在一级烟草固体物中加入水和含有耐热细胞溶解素的溶液，在55-75℃条件下浸提5-10min，过滤，得到二级浸提液和二级烟草固体物；

(3)重复步骤(2)，得到三级浸提液和三级烟草固体物；

(4)合并一级浸提液、二级浸提液和三级浸提液，离心除去杂质，取上清液浓缩至26波美度，得到烟草浸提浓缩液；

(5)将三级烟草固体物打浆、抄造，制得烟草薄片片基，再将烟草浸提浓缩液涂布至烟草薄片片基上，干燥，制得烟草薄片。

步骤(1)中烟草原料与水的固液比为1:5-6，步骤(2)中一级烟草固体物与水的固液比为1:5-6。

步骤(1)中含有耐热细胞溶解素的溶液的用量为烟草原料与水总体积的1/500-1/200；步骤(2)中含有耐热细胞溶解素的溶液的用量为一级烟草固体物与水总体积的1/500-1/200。

所述的含有耐热细胞溶解素的溶液的制备方法为：

(1)将耐热细胞溶解素基因连接至载体，构建重组质粒；

(2)将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞中，通过蓝白斑筛选含有该耐热细胞溶解素基因的阳性克隆子；

(3)将阳性克隆子单菌落接种至LB液体培养基5ml中，37℃培养过夜，得到大肠杆菌菌液，﹣20℃保存备用；

(4)将﹣20℃保存的大肠杆菌菌液10μl接种至LB液体培养基100ml中，37℃培养过夜；

(5)将步骤(4)培养过夜的菌液2ml接种至LB液体培养基2000ml中，37℃振荡培养至菌液OD₆₀₀为0.6，降温至18℃；

(6)在步骤(5)的菌液中加入IPTG至IPTG终浓度为0.5mM，18℃继续振荡培养至OD₆₀₀达到1.0，离心，收集菌体沉淀；

(7)将菌体沉淀悬浮于50ml预冷的NTA-0缓冲液中，冰浴，超声破碎菌体，离心，收集上清液，即得。

所述的耐热细胞溶解素基因为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

所述的三级烟草固体物打浆的温度为40℃。

本发明的有益效果：