[发明专利]利用人类外周血中DNA甲基化水平与生物节律相关性检测案件发生时间的方法

说明书

本发明公开了一种利用人类外周血中DNA甲基化水平与生物节律相关性检测案件发生时间的方法。本发明方法不仅具有一定的精度，并且受外界因素影响较小。可以与传统方法互为补充，提高司法鉴定的准确度。

技术领域

本发明涉及一种利用人类外周血中DNA甲基化水平与生物节律相关性检测案件发生时间的方法。

背景技术

当前法医对刑事案件的时间推定，尤其是死亡时间的推定，主要通过如下手段并结合现场勘测等证据进行。

超生反应：由于人体各种细胞、组织和器官对缺氧的耐受能力不一致，临床死亡发生后能存活的时间也不一样。因此能够根据还具有生活能力的组织、器官对外界刺激所发生的反应判断死亡时间。

尸体现象：死亡后24小时内所发生的尸僵,尸斑，尸冷，自溶，角膜浑浊。死亡超过24小时发生的腐败，白骨化，尸蜡形成等

死后生化改变：死亡后肌酸激酶与肌钙蛋白等物质的水平存在随死亡时间延长而增长的现象。

其他还有如组织学改变，死前进餐时间等推定方法。但这些传统方法，都存在着一定的缺陷与不足，受周围环境的影响较大，时常不能给出较准确的时间推定。

生物节律(Circadian rhythm)是一种内源性、持续的生理现象，呈现以约24小时为周期的变动。哺乳动物体内的细胞、组织、器官均存在生物节律，并随着外部环境的变化进行内源性的调整以保持相对的稳定性。因此，生物节律可以作为时间推定的一条新思路。

哺乳动物生物节律的调控起搏点位于下丘脑区域的视交叉上核，与一些外周节律起搏器共同维持机体的生物节律。根据现有研究，下丘脑视交叉上核主要通过一些由“节律基因”组成的转录—翻译反馈调控网络来调节生物节律。DNA甲基化作为DNA化学修饰的一种形式，能在不改变DNA碱基序列的前提下改变表现型，在现有的研究中已证实，节律基因的甲基化水平与生物节律密切相关。

发明内容

本发明旨在克服和补充传统司法鉴定时间推定方法受环境影响过大的缺陷，提供一种利用人类外周血中DNA甲基化水平与生物节律相关性检测案件发生时间的方法。

所述方法包括如下步骤：

(1)检测正常人体外周血组织在不同时间点的DNA的甲基化水平；

(2)根据步骤(1)的结果绘制标准曲线，所述标准曲线公式为：

其中，Y_ij(t)是正常人体外周血组织i中CpG点j在时间点t的甲基化水平；μ_ij为正常人体外周血组织CpG位点特异的均值，Rj为振幅，ξj是相位；对结果p值进行Bofferoni校正，对于CpG位点甲基化差异达到全基因组节律性表观显著水平的定义值为P<1.82e-7(＝0.05/275337)，而对于基因表达差异达到全基因组节律性遗传显著水平的定义为P<3.22e-6(＝0.05/15519)；

(3)检测待测样本的DNA的甲基化水平Y_ij(t)；

(4)将步骤(3)所测结果代入如下公式，通过计算得出时间点t，即为推算的案件发生时间：

Y_ij(t)是样本i中CpG点j在时间点t的甲基化水平；μ_ij为样本CpG位点特异的均值，Rj为振幅，ξj是相位；ε_ij(t)是时间t点上的随机误差；对结果p值进行Bofferoni校正，对于CpG位点甲基化差异达到全基因组节律性表观显著水平的定义值为P<1.82e-7(＝0.05/275337)，而对于基因表达差异达到全基因组节律性遗传显著水平的定义为P<3.22e-6(＝0.05/15519)。

检测人外周血样本甲基化水平的试剂为本领域常规试剂，检测方法为本领域常规方法。