[发明专利]一种肿瘤靶向多肽-药物偶联衍生物、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种肿瘤靶向多肽-药物偶联衍生物，其特征在于，所述肿瘤靶向多肽-药物偶联衍生物包括靶向多肽、长效多肽和药物分子；

其中，所述靶向多肽通过柔性连接肽连接在长效多肽的C端形成融合肽，所述融合肽作为所述药物分子的载体，所述药物分子与融合肽中的长效多肽以化学键相连；

所述长效多肽为与人血清白蛋白具有亲和相互作用的多肽或蛋白结构域。

2.根据权利要求1所述的肿瘤靶向多肽-药物偶联衍生物，其特征在于，所述长效多肽的分子量为1-20kDa；

优选地，所述长效多肽的N末端的10个氨基酸中有半胱氨酸、赖氨酸或、非天然氨基酸中的任意一种或至少两种的组合，优选半胱氨酸；

优选地，所述半胱氨酸的数量为1-3个；

优选地，所述赖氨酸的数量为0-3个；

优选地，所述非天然氨基酸的数量为0-3个；

优选地，所述长效多肽为链球菌G蛋白中与白蛋白结合结构域、抗白蛋白抗体抗原结合结构域或白蛋白中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述长效多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1-4所示。

3.根据权利要求1或2所述的肿瘤靶向多肽-药物偶联衍生物，其特征在于，所述靶向多肽为与肿瘤组织的过表达受体具有亲合力的氨基酸序列配体；优选地，所述靶向多肽的氨基酸序列的结构通式为(R/K-X-Y-R/K)_n

其中，R为精氨酸，K为赖氨酸，X和Y为任意氨基酸，n为1-5范围内的自然整数；

优选地，所述靶向多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5-12所示。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的肿瘤靶向多肽-药物偶联衍生物，其特征在于，所述靶向多肽通过柔性连接肽连接在长效多肽的C端组成长效多肽-靶向多肽的融合肽，所述长效多肽-靶向多肽通过多肽合成的方法和/或重组表达的方法获得，优选为重组表达的方法获得；

优选地，所述柔性连接肽的通式为(G_m-S)_i

其中，G为甘氨酸，S为丝氨酸，m和i独立地选自1-10范围内的自然整数；

优选地，所述融合肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.13-14所示；

优选地，所述融合肽的基因序列如SEQ ID NO.15-16所示。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的肿瘤靶向多肽-药物偶联衍生物，其特征在于，所述药物分子为具有抑制作用和/或杀伤作用的小分子化合物；

优选地，所述药物分子的分子量不超过2000Da；

优选地，所述药物分子为多柔比星衍生物、单甲基澳瑞他汀D衍生物、单甲基澳瑞他汀E衍生物、单甲基澳瑞他汀F衍生物或美登素中的任意一种或至少两种的组合。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的肿瘤靶向多肽-药物偶联衍生物，其特征在于，所述药物分子与融合肽中的长效多肽以化学键相连，所述相连是通过长效多肽N端序列氨基酸残基上的氨基和/或巯基形成稳定化学键进行连接；

优选地，所述N端序列氨基酸为N端的1-10个氨基酸；

优选地，所述的化学键为碳硫单键、硫硫单键或碳氮单键中的任意一种或至少两种的组合。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的肿瘤靶向多肽-药物偶联衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)通过基因工程手段，将长效肽与靶向肽通过大肠杆菌工程菌进行融合表达，经过离子交换层析纯化，获得长效-靶向双功能的融合肽；

(2)将融合肽溶于偏碱性缓冲溶液中，将药物分子溶解于有机溶剂中，再将药物分子逐滴加入融合肽溶液中，温和搅拌，室温避光反应，离心去除沉淀，得到偶联粗产物；

(3)将步骤(2)得到的偶联粗产物通过凝胶过滤层析法分离纯化，去除未偶联的小分子，得到本申请肿瘤靶向多肽-药物偶联衍生物，冻干保存。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述偏碱性缓冲溶液的pH为8.5-9.5；

优选地，步骤(2)所述的有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺和/或二甲基亚砜；

优选地，所述有机溶剂的体积分数为20-60％，优选为25-50％。