[发明专利]一种榄叶柯初代培养芽诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及榄叶柯无性繁殖技术，尤其是一种榄叶柯初代培养芽诱导方法。

背景技术

榄叶柯（Lithocarpus oleaefolius A. Camus）又名榄叶石栎、榄叶椆，系壳斗科（Fagaceae）柯属（Lithocarpus）乔木，高8～15米，芽鳞几无毛，一年生枝、叶柄、叶背及花序轴被易脱落的褐锈色或棕黄色长柔毛，二年生枝暗褐黑色，皮孔甚小，不易察见。树皮暗灰至灰黑色，不开裂，树高约13米的树皮厚约8毫米，内皮淡红褐色，脊棱显著突出。果实含淀粉为50%～60%。分布于江西、福建、湖南、贵州四省南部、广东、广西。生于海拔500～1200米山地杂木林中。

目前，榄叶柯资源仍处于野生分布状态，但随着保持植物多样性的需求，规模化人工栽培榄叶柯资源势在必行。组织培养技术是一种快速无性繁殖技术，选择榄叶柯优良家系或者无性系为材料，通过组织培养方法繁殖苗木，既可以满足生产上的数量要求，又可保持母本性状。组织培养过程中，初代培养是制约组织培养顺利进行的关键步骤，其中涉及了外植体的获取、外植体的消毒、培养基选择以及培养过程中培养体褐变、苗木玻璃化等重要问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能克服芽诱导过程中外植体褐变以及玻璃化等问题，提高芽诱导率，出芽指数以及萌芽生长状况，获取数量多、质量好的萌芽，从而满足增殖培养的需要，促进榄叶柯组织培养快速繁殖体系的建立的榄叶柯初代培养芽诱导方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种榄叶柯初代培养芽诱导方法，采用榄叶柯基部萌条为外植体，通过外植体无菌处理后，将外植体接种于优质初代培养芽诱导培养基上，置于适宜的温度、湿度和光照强度条件下进行培养，诱导芽的萌发；其操作步骤为，

（1）外植体选择：选择榄叶柯基部萌发的半木质化的萌条为外植体；

（2）外植体消毒及接种：将榄叶柯萌条经过洗洁精清洗，流水冲洗和化学试剂处理消毒后，剪切成茎段接入芽诱导培养基中；

（3）芽诱导培养：将接种后的外植体置于适宜室内条件下培养。

以上所述的芽诱导培养基其原料含量为：1/3～1/2改良WPM培养基+6-KT 1.0～2.0mg/L+活性炭10mg/L+琼脂5.0g/L+蔗糖20.0g/L。

以上所述的改良WPM培养基组分和体积重量比为：NH₄NO₃ 820 mg/L，CaCl₂·2H₂O 192 mg/L，MgSO₄·7H₂0 300 mg/L，KH₂PO₄ 250 mg/L，Ca(NO₃)₂·4H₂O 180 mg/L，KI 0.83 mg/L，H₃BO₃ 6.2 mg/L，MnSO₄·H₂O 22.4 mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8.6 mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25 mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.25 mg/L，Na₂·EDTA 37.3 mg/L，FeSO₄·7H₂O 27.8 mg/L，肌醇85 mg/L，烟酸1.0 mg/L，盐酸吡哆醇1.0 mg/L，盐酸硫胺素2.0 mg/L，甘氨酸2.0 mg/L。

以上所述的萌条是长为6~9cm、直径0.2～0.4 cm的半木质化的萌条。

以上步骤（2）所述的消毒及接种方法是将榄叶柯萌条针叶剪去，置于三角瓶中，加入体积浓度为1~5 %的洗洁精溶液，采用纱布封住瓶口，置于转速为200 r/min的摇床上清洗10~15 min后置于流水下冲洗1~2 h，然后用无菌水清洗2次，将外植体转到超净工作台上用体积浓度0.1%氯化汞溶液浸泡消毒10 min；再采用无菌水冲洗8~10次后剪成长为3.5~4.0 cm长的茎段接种于芽诱导培养基中，每瓶接种2个茎段。

以上步骤（3）所述的适宜室内条件为：暗培养10d后转为光照500～1000 lx，光照8～12h/d；培养温度20±1℃，湿度为50~55 %。