[发明专利]叠加的除草剂耐受性事件8264.44.06.1、相关转基因大豆系、及其检测

说明书

本申请提供叠加的除草剂耐受性大豆事件8264.44.06.1、相关转基因大豆系、及其检测，包括新颖的表达盒和转基因插入物，其包含赋予对草甘膦、芳氧基链烷酸酯、和草丁磷除草剂的抗性的多种性状。还提供控制抗性杂草的方法、植物育种和除草剂耐受性植物。在一些实施方案中，事件序列可以与其它性状，包括例如其它除草剂耐受性基因和/或昆虫抑制性蛋白质“叠加”。还提供用于检测大豆及相关植物材料中的事件pDAB8264.44.06.1的端点TaqMan PCR测定法。一些实施方案可以实施对植物材料的高通量接合性分析，并且可以使用其它实施方案来独特地鉴定包含本发明事件的任何育种大豆系的接合性。还提供可用于进行这些测定法的试剂盒和条件。

本申请是2011年12月2日提交的申请号为201180066807.X(PCT申请号PCT/US2011/063129)、发明名称为“叠加的除草剂耐受性事件8264.44.06.1、相关转基因大豆系、及其检测”的发明专利申请的分案申请。

发明背景

草甘膦(N-膦酰基甲基甘氨酸(phosphonomethylglycine))，即一种广谱除草剂，抑制5-烯醇丙酮酰莽草酸(enolpyruvylshikimate)-3-磷酸合酶(EPSPS)，即一种在生成植物细胞中必需的芳香族氨基酸的莽草酸生物合成途径中的酶。对EPSPS的抑制有效破坏蛋白质合成，由此杀死受影响的植物细胞。由于草甘膦是非选择性的，它杀死杂草和作物植物两者。如此，当可以将作物植物修饰为对草甘膦有抗性，容许期望的植物幸免于对草甘膦的暴露时，它在作物植物的情况下是有用的。

已经使用重组DNA技术来分离草甘膦抗性的突变体EPSP合酶。此类草甘膦抗性突变体EPSP合酶可以转化到植物中，并且对经转化的植物赋予草甘膦抗性。举例而言，自土壤杆菌(Agrobacterium)菌株CP4分离草甘膦耐受性基因，如美国专利No.5,633,435中所描述的。在此通过提及而并入此参考文献及本文中引用的所有参考文献。

已经经由引入突变创建其它草甘膦耐受性基因。这些包括由Comai分离并记载于美国专利No.5,094,945,4,769,061和4,535,060的AroA基因。已经利用通过用丙氨酸残基取代氨基酸位置80和120之间的甘氨酸残基得到的单一突变体，如记载于美国专利No.5,310,667的。双重突变体已经记载于美国专利No.6,225,114和5,866,775，其中在上述突变外，将第二处突变(用苏氨酸残基取代位置170和210之间的丙氨酸残基)引入野生型EPSPS基因中。

其它工作导致草甘膦抗性玉米的生成，其经由导入携带由GenBank登录号X63374编码的氨基酸序列的残基102(将苏氨酸改变为异亮氨酸)和残基106(将脯氨酸改变为丝氨酸)处的突变的经修饰的玉米EPSPS基因进行。参见美国专利No.6,566,587和6,040,497。

在大豆中提供对草甘膦的抗性的事件的例子包括大豆系GTS 40-3-2(Padgette等1995)、大豆事件MON89788(美国专利No.7,608,761)，美国专利No.7,608,761涉及大豆事件MON89788，其中每种通过将cp4epsps基因插入大豆中生成。

草甘膦耐受性耕种系统的普遍采用和草甘膦日益增加的使用已经促成近年来草甘膦抗性且难以控制的杂草的流行。在种植者面对草甘膦抗性杂草或向更难以控制的杂草物种的转变的地区，种植者可以通过与会控制漏过的杂草的其它除草剂罐混合或交替来补偿草甘膦的弱点。