[发明专利]一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及烟草致病菌的抑制方法技术领域，具体的涉及一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法。

背景技术：

烟草黑胫病是烟草生产上的一种毁灭性病害，严重制约我国各烟区烟叶的生产。据不完全统计，我国平均每年因烟草黑胫病造成的经济损失达1亿元以上。烟草黑胫病菌在无烟草存在的土壤中可存活5年或者更长，在风干土中可存活18个月，侵染烟草植株后，会严重影响烟叶产质量的提高。针对黑胫病菌的抑制或防治，通常采用化学药物，化学药物对环境污染大，时间长久不利于农业生产和环境发展，因此，需要选取一种新的方法来抑制黑胫病菌。

生物质炭是生物质在高温下热解生成，是一种含碳丰富的固体物质（SOHI S P et.al，2010；杨平平，2012），它具有较好的孔隙结构和比表面积，营养元素丰富，能改善农田环境，在农业方面应用广泛。我国是烟草种植大国，种植面积居世界首位，每年都会产生大量的烟草废弃物（主要为烟草秸秆），目前来说主要的处理方式是焚烧和直接还田，焚烧会造成元素损失和环境污染，而秸秆还田则容易导致严重的土传病害。因此，将烟草秸秆炭化后进行应用可以充分发挥其优点，减少秸秆焚烧造成的区域环境污染。现有技术中的记载，生物质炭的利用，多数集中在炭基肥的利用上，例如中国专利申请CN104292044A公开了一种酸性土壤改良并防治烟草根茎病害的生物质炭基肥。（其通过生物质炭基肥来改良土壤结构，增加水肥利用率，提高土壤肥力，提高烟株抗性，丰富土壤微生态，促进作物生长发育进而达到防治烟草根茎病，但是并无实验数据以证明其对根茎病的影响，效果未知）

其他记载中：在多孔的无土介质中施加生物质炭能减少辣椒和番茄叶部真菌病害的侵入（Ellen R.Graber et.al，2010）。施用椰子生物炭后，芦笋的镰刀菌感染率明显降低（Lehmann J，2011）。与对照相比，施用木炭的某些处理中，青枯菌对番茄的侵染明显降低（Lehmann J，2011）。到目前为止，已经在6个不同的致病体系中发现在土壤中施加生物质炭能影响土传病害的发生程度（Graber ER et.al，2014）。通过现有文献记载，已经报道的关于生物质炭对植物病害的影响主要集中在辣椒、番茄、芦笋、大豆等作物上（Ellen R.Graber et.al，2010；Lehmann J，2011；Jaiswal AK，2013），而对烟草及烟草黑胫病的研究尚未见报道，而烟草又是我国重要的经济作物之一，烟草黑胫病是影响其产质量的主要病害，所以研究生物质炭对烟草黑胫病影响是十分必要的。鉴于上述现有技术，本发明旨在提供一种方法简单，使用方便，对黑胫病菌抑制效果好的一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点，提供一种方法简单，使用方便，对黑胫病菌抑制效果好的一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法。

为了实现上述目的，本发明提供了一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法，其中，包括

方法一，配置添加了生物质炭培养基的抑制法，

方法二，将添加了生物质炭培养基的pH调节回培养基原始pH的抑制法，

方法三，配置菌土抑制法。

方法一包括如下步骤：

配置燕麦培养基：燕麦片33g，琼脂粉18g，去离子水1000ml，

在燕麦培养基的配置过程中加入不同比例的稻壳炭和/或烟草秸秆炭并测定相应的pH值；

接种黑胫病菌株并采用十字交叉法测定菌落直径，以培养2d的菌落直径变化计算黑胫病菌菌丝的生长速率及抑制率。

方法二包括如下步骤：

配置燕麦培养基：燕麦片33g，琼脂粉18g，去离子水1000ml，

在燕麦培养基的配置过程中加入不同比例的稻壳炭和/或烟草秸秆炭并测定相应的pH值；接着用0.1mol的HCl或NaOH溶液将变化的pH值调回到初始值，初始值为不加生物质炭的培养基所对应的pH值，

灭菌后进行接菌实验，培养结束后，挑取菌丝置于载玻片上，在显微镜下观察黑胫病菌菌丝形态的变化。

方法三包括如下步骤：

菌谷准备：将谷子加水煮开至半数谷粒呈开花状，装入500ml三角瓶中，121℃高压灭菌20 min；在无菌条件下，取1cm×1cm的烟草黑胫病菌菌块转接到盛有菌谷的三角瓶中，28℃培养14d备用；