[发明专利]基于金纳米粒子的靶向表皮生长因子受体EGFR的人工抗体及其制备方法

说明书

本发明涉及基于金纳米粒子的靶向表皮生长因子受体EGFR（epidermal growth factor receptor）的人工抗体及其制备方法。该人工抗体的特征是由金纳米粒子和一段设计的多肽序列组成，通过重构多肽在纳米金表面的构象，从而制备出纳米金人工抗体。由于该人工抗体具有特异性识别EGFR的性能，并且结合力强、稳定性好，因此可以利用这种人工抗体特异性的靶向肿瘤细胞表面过表达的EGFR，并且这种具有特异性识别EGFR功能的人工抗体在疾病诊断、靶向治疗、光热治疗和药物载带等领域具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种靶向表皮生长因子受体EGFR（epidermal growth factorreceptor）的人工抗体及其制备方法。特征是一种基于金纳米粒子的靶向表皮生长因子受体EGFR的人工抗体及其制备方法。

背景技术

定向输送纳米颗粒到达肿瘤部位对于纳米药物在生物体内分子成像和靶向治疗等领域至关重要。近年来，为了解决纳米颗粒和靶点位置结合力差和特异性低的问题，人们越来越多的通过将天然抗体结合到纳米颗粒上，利用抗体和抗原的高特异性和强结合力的性质，从而将纳米颗粒定向输送到靶点位置并且可以延长纳米颗粒在体内的循环时间。

研究发现在许多实体肿瘤中存在EGFR的高表达，EGFR与肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡都有一定的关系。因此，EGFR作为一个靶向肿瘤细胞的重要靶点被越来越多的研究和利用，并且EGFR的天然抗体西妥昔单抗和帕尼单抗已经被成功地应用到肿瘤的临床治疗中。然而天然抗体存在自身的缺陷，例如稳定性差、价格昂贵，因此合成一种稳定性好并且能够特异性结合EGFR的人工抗体对于纳米药物在生物体内分子成像、靶向治疗和药物载带具有重要价值。

由于纳米金具有生物相容性好、比表面积大和易于表面修饰等优良特性，这使其在细胞检测、药物合成和运输、光化学治疗等方面具有广泛的应用价值。因此通过功能化纳米粒子制备能够靶向EGFR的纳米药物已经被广泛的研究，然而这些纳米药物主要是通过将具有特异性识别EGFR功能的蛋白质抗体修饰到纳米粒子表面，利用修饰的蛋白质抗体的肿瘤靶向性从而将纳米药物输送到肿瘤部位。虽然这种方法合成的纳米药物具有较好的肿瘤靶向性，但是由于大分子蛋白质抗体提取困难并且稳定性差，使得这种方法合成的纳米药物与EGFR的结合力低、稳定性差并且制备成本高。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种基于金纳米粒子的靶向表皮生长因子受体EGFR的人工受体。

本发明的目的之二在于提供该人工受体的制备方法。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种基于金纳米粒子的靶向表皮生长因子受体EGFR的人工受体，由金纳米粒子以及多肽组成，其特征在于所述的多肽由识别区、两个调控区和两个固定区组成；所述的识别区的两端各连接一个调控区；而在调控区的两端各连接一个固定区；该多肽通过其两端的固定区固定在金纳米粒子表面从而形成环状结构；

所述的调控区用来调节多肽的长度，由0～8个非半胱氨酸的氨基酸序列随机排列组成；

所述的固定区通过巯基和纳米金表面自发形成S-Au键，从而将所述多肽两端固定在金纳米粒子表面，每1nm²金纳米粒子表面积上固定0.05～2个所述多肽，从而使多肽在金纳米粒子表面形成环状构象。

上述的识别区的氨基酸序列为AWYGTLYEYD、AWYGTVYEYD、SWYGTLYEYD或AWYGSLYEYD。

上述的固定区为：半胱氨酸或将带有巯基的聚乙二醇通过脱水缩合修饰在调控区的两端形成固定区。

上述的组成调控区的氨基酸为：甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺。。