[发明专利]一种体外定量测定vWF-CP酶活性的底物、方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201610943066.3 | 申请日： | 2016-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN106568940B | 公开（公告）日： | 2018-11-27 |
| 发明（设计）人： | 林毅然;王季武;黄海燕 | 申请（专利权）人： | 吴江华药生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/00 | 分类号： | C07K14/00;G01N33/535 |
| 代理公司： | 无锡互维知识产权代理有限公司 32236 | 代理人： | 庞聪雅 |
| 地址： | 215000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 底物 氨基酸序列 试剂盒 酶标抗体 酶活性 定量测定 酶标板孔 功能区 缓冲液 酶标板 稀释液 洗涤液 显色液 终止液 种体 体外定量测定 包被抗体 待测样本 生物领域 灵敏度 酶标仪 吸光度 显色剂 抗体 筛查 | ||
1.一种体外定量测定vWF-CP酶活性的底物，其特征在于：包括vWF功能区氨基酸序列，并在vWF功能区氨基酸序列的N端和C端分别结合有HIS标签氨基酸序列和FLAG标签氨基酸序列，所述vWF功能区氨基酸序列为vWF73，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述底物的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
2.一种采用根据权利要求1所述底物的体外定量测定vWF-CP酶活性的非疾病的诊断和治疗的方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、将酶标板孔预先包被对底物FLAG标签氨基酸序列具有特异性的抗体；
S2、在酶标板孔中加入底物，孵育一段时间后洗涤；
S3、在酶标板孔中加入待测样本，孵育一段时间后洗涤；
S4、在酶标板孔中加入对底物HIS氨基酸序列具有特异性的酶标抗体，孵育一段时间后洗涤；
S5、在酶标板孔中加入显色剂，孵育一段时间加入终止液终止显色反应；
S6、酶标仪下测定酶标板孔中液体的吸光度。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤S3中在酶标板孔中加入待测样本与缓冲液的混合液，然后孵育一段时间后洗涤。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述缓冲液为HEPES缓冲液。
5.一种采用根据权利要求1所述底物的体外定量测定vWF-CP酶活性的试剂盒，其特征在于：包括包被有对底物FLAG标签氨基酸序列具有特异性的抗体的酶标板、底物、稀释液、洗涤液、缓冲液、对底物HIS标签氨基酸序列具有特异性的酶标抗体、显色液和终止液，或者包括酶标板、对底物FLAG标签氨基酸序列具有特异性的抗体、底物、稀释液、洗涤液、缓冲液、对底物HIS标签氨基酸序列具有特异性的酶标抗体、显色液和终止液。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括标准品1和标准品2，所述标准品1包括含正常酶活性vWF-CP的标准液与终止液的混合液，所述标准品2为含正常酶活性vWF-CP的标准液。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述缓冲液为HEPES缓冲液。
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