[发明专利]一种甜叶菊组培方法

说明书

技术领域

本发明属于组培生产技术领域，具体涉及一种甜叶菊组培方法。

背景技术

甜叶菊，是原产于南美洲巴拉圭的菊科甜叶菊属多年生草本植物，由于甜叶菊所含的甜菊糖苷有制血糖、降低血压、促进新陈代谢以及治疗糖尿病、肥胖症、调节胃酸、恢复神经疲劳的功效，并且物理、化学性质稳定，无发酵性特点，其制品有比较长的保质期，特别适合作为糖尿病、高血压等病患者食品的甜味剂、保健品添加剂等，具有广阔的市场前景和应用范围。

自我国于20世纪70年代年引种甜叶菊并成功扩大种植以来，已经有30余年的历史，但由于甜菊的繁育特性，传统的繁殖方式包括种子、扦插方式。但是用种子繁育的方法，成活率低；而扦插繁殖导致品质退化，并且这两种繁育方式时间长、需要大量以茎尖、带腋芽的茎段、种子等材料。

发明内容

本发明的目的是提供一种甜叶菊组培方法，能降低繁殖的成本，生长周期短、繁殖率高、方便管理、有利于工业化生产和自动化监控，大大的节约了人力、物力和田间作物的土地。

本发明提供了如下的技术方案：

一种甜叶菊组培方法，包括以下步骤，

1）抑菌液的配制，将福美锌400-600倍液与10%的维生素C水溶液混合，所述福美锌溶液400-600倍液与10%维生素C水溶液的体积比为2：1，得到抑菌液A；配制0.2%的HgCl₂溶液，得到抑菌液B；

2）外植体的获取，取甜叶菊顶端未老熟的叶片，使用解刨刀沿着甜叶菊叶片的茎干位置横切出长15-20 mm，宽10-15 mm的叶片条；

3）培养基方瓶和外植体的消毒，将培养基方瓶放入所述抑菌液B中浸泡20-30分钟，用无菌水冲洗2-4次，每次3-5分钟，将所述叶片条放入抑菌液A中浸泡10-20分钟，用无菌水洗净，然后放入抑菌液B中浸泡20-30分钟，用无菌水洗净；

4）外植体分化芽，将外植体接种到装有芽诱导培养基的培养基方瓶中，在28-30℃下，光暗培养15-20天，外植体分化出芽，所述芽诱导培养基为MS+萘乙酸0.1-0.3 mg/L+6-苄基嘌呤0.4-1.0 mg/L+琼脂8-10 g/L；

5）芽生根成苗，当步骤4）中的芽长至3-5 cm，将其相互分开成单株，并转接至装有生根培养基的培养基方瓶中，在28-30℃下，光暗培养20-25天，长出多条根并出现白色根毛，所述生根培养基为1/2MS+吲哚乙酸0.1-0.2 mg/L+萘乙酸0.1-0.2 mg/L+琼脂5-7 g/L+硫酸亚铁0.5-1.5 mg/L；

优选的，所述步骤3）中培养基方瓶的规格为500 ml。

优选的，所述步骤4）中光培养的光照强度为1300勒克斯，步骤5）中光培养的光照强度为1800勒克斯。

本发明提供的甜叶菊组织培养方法，取材容易，可以迅速扩繁出大量种源，能降低繁殖的成本，生长周期短、繁殖率高、方便管理、有利于工业化生产和自动化监控，大大的节约了人力、物力和田间作物的土地。

具体实施方式

实施例1

一种甜叶菊组培方法，包括以下步骤，

1）抑菌液的配制，将福美锌400倍液与10%的维生素C水溶液混合，所述福美锌溶液400倍液与10%维生素C水溶液的体积比为2：1，得到抑菌液A；配制0.2%的HgCl₂溶液，得到抑菌液B；

2）外植体的获取，取甜叶菊顶端未老熟的叶片，使用解刨刀沿着甜叶菊叶片的茎干位置横切出长15 mm，宽10 mm的叶片条；

3）培养基方瓶和外植体的消毒，将培养基方瓶放入所述抑菌液B中浸泡20分钟，用无菌水冲洗2次，每次3分钟，将所述叶片条放入抑菌液A中浸泡10-分钟，用无菌水洗净，然后放入抑菌液B中浸泡20分钟，用无菌水洗净；

4）外植体分化芽，将外植体接种到装有芽诱导培养基的培养基方瓶中，在28℃下，光暗培养15天，外植体分化出芽，所述芽诱导培养基为MS+萘乙酸0.1 mg/L+6-苄基嘌呤0.4 mg/L+琼脂8 g/L；

5）芽生根成苗，当步骤4）中的芽长至3 cm，将其相互分开成单株，并转接至装有生根培养基的培养基方瓶中，在28℃下，光暗培养20天，长出多条根并出现白色根毛，所述生根培养基为1/2MS+吲哚乙酸0.1 mg/L+萘乙酸0.1 mg/L+琼脂5 g/L+硫酸亚铁0.5 mg/L；

所述步骤3）中培养基方瓶的规格为500 ml。