[发明专利]一种用人微血管内表皮细胞ICAM-1蛋白表达量检测凉茶抗炎活性的方法

说明书

本发明涉及一种用人微血管内表皮细胞ICAM‑1蛋白表达量检测凉茶抗炎活性的方法。发明点在于，不通过RNA提取，直接将HMEC‑1细胞表面ICAM‑1蛋白用荧光抗体标记后，通过流式细胞仪检测其表达量，具体为：将HMEC‑1细胞接种在细胞培养板中，待细胞长至单层，用凉茶检测液与细胞孵育，再用LPS处理细胞，诱导发生炎症，发生炎症细胞表面ICAM‑1蛋白表达量显著增加，将凉茶检测液孵育细胞后，ICAM‑1蛋白的表达量受到抑制。利用荧光标记ICAM‑1抗体标记细胞表面ICAM‑1蛋白，用流式细胞仪定量检测凉茶检测液对发炎细胞表面ICAM‑1蛋白的表达量，以蛋白的表达量作为衡量凉茶检测液抗炎效果的指标。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，具体涉及一种用人微血管内表皮细胞(HMEC-1)表面细胞间粘附因子(ICAM-1)蛋白表达量检测凉茶抗炎活性的方法。更具体地说是在细胞水平上，先将凉茶与HMEC-1细胞共同孵育，然后利用脂多糖(LPS)诱导HMEC-1细胞产生炎症反应，即LPS诱导HMEC-1细胞表面ICAM-1蛋白高表达，然而经过不同的凉茶测液预处理后，HMEC-1细胞的ICAM-1蛋白分子表达水平会受到不同程度的抑制，最终通过计算凉茶检测液对HMEC-1细胞表面ICAM-1蛋白分子表达水平的抑制率高低，定量分析凉茶的抗炎效果。

背景技术

炎症是机体应对病原感染、细胞应激以及组织损伤而产生的一种本能而又必要的反应。最初招募的先天免疫细胞又会产生一系列的趋化因子和粘附因子，这些炎症因子将在机体招募其它免疫细胞、杀死病原菌、清理死细胞以及刺激机体修复的过程中发挥重要作用(J.F.Foley,2003；Gabriel and Annalisa M.VanHook,2013；J.F.Foley,2015)。在发炎的组织中，脉管通透性往往在一定范围内增加，一方面内皮细胞开始表达多种类型的粘附因子(Adhesion molecular)：选择素、整合素以及免疫球蛋白，这些蛋白在调控机体招募白细胞到发炎部位过程中发挥着重要作用(Koning et al.,2002；Metselaarand Storm,2005；Ding et al.,2006)；另一方面，机体产生趋化因子，通过浓度依赖，定向诱导白细胞的迁移。白细胞响应趋化因子和粘附因子构成了外来病原入侵后的第一道防线(Murphy PM,1994；Gangur M and Oppenheim JJ.,2000；Chen Xin et al.,2002)。特别是在LPS诱导的急性炎症模型中，中性粒细胞需要粘附并迁移穿过血管内皮细胞从而到达炎症部位。一开始，借助于选择素家族基因(Selectin gene family)的表达，在白细胞表面表达L-selectin，在内皮细胞表面表达E-selectin以及P-selectin，两者相互作用产生初步粘附(Stoolman LM,1989；Springer TA,1990；Butcher EC,1991)。然而在流动的血液环境中初始的粘附是不够的，更牢固的结合需要中性粒细胞表面的FLA-1整合蛋白与血管内皮细胞表面的细胞间粘附因子(ICAM-1)相结合(Springer TA,1990；Butcher EC,1991)。本专利要求的方法在体外模拟了该炎症反应过程。

炎症带来的问题不在于它的顺利启动，而在于当威胁消除时往往不能及时有效的平息炎症(Carl Nathan and Aihao Ding,2010)。研究发现过度的天然免疫反应，伴随着过早地招募炎性白细胞，就是造成1918年流感大面积发病的关键原因(Kobasa et al.,2007)。后来研究表明，如果炎症反应没有被终止，或者如果组织遭受继续的炎症，这实际上导致组织损伤而不是促进愈合。慢性炎症可以导致多种疾病，哮喘和类风湿性关节炎到动脉粥样硬化，炎性肠病，甚至是癌症(J.F.Foley,2003；Rasch and Algul,2014；J.F.Foley,2015)。