[发明专利]一种用于凝血酶检测的纸基适体荧光传感器的构建

权利要求书

1.一种用于凝血酶检测的纸基适体荧光传感器的构建方法，其特征是包括以下步骤：

1.1在计算机上设计纸芯片疏水蜡打印图案，纸芯片疏水蜡打印图案由两个边长为20mm的正方形组成，两个正方形并排呈现且中间存在1mm宽的折叠区，左侧正方形的左上角和右下角分别是直径为8mm的圆形亲水孵化区域和工作区域，右侧正方形的右上角和左下角分别是两个直径为8mm的圆形孔洞区，折叠区处折叠后与左侧圆形区域刚好重叠；

1.2将步骤1.1中设计的打印图案通过蜡打印机打印在已裁剪为A4大小的色谱纸上，然后将带有蜡图案的A4色谱纸通过加热到125ºC的平板加热器加热2 min，使蜡融化并浸透整个纸的厚度，形成疏水墙，得到用于荧光测定的工作区域和用于荧光标记物和适配体反应的孵化区域；

1.3将步骤1.2中得到的色谱纸的工作区域进行功能化，生长AuPt双金属后进行适配体1的修饰，滴加50 μL待检测的凝血酶，反应45 min后用磷酸缓冲溶液清洗，然后用牛血清白蛋白封锁非活性位点；

1.4在步骤1.2中得到的色谱纸的孵化区域滴40 μL合成好的QDs@ZnO荧光标记物和 60μL的1 µM适配体2，进行荧光标记物和适配体2的反应；

1.5将纸芯片沿着折叠线折叠，连有适配体2的荧光标记物QDs@ZnO到达含有目标物的工作区域，反应30 min后用磷酸缓冲溶液洗涤；

1.6将步骤1.5中纸芯片工作区域放入荧光设备中，在340 nm的激发波长下进行荧光测定，绘制荧光强度与凝血酶的浓度关系，实现对凝血酶的精确检测。

2.根据权利要求1所述一种用于凝血酶检测的纸基适体荧光传感器的构建方法，其特征在于，在步骤1.3中所述将步骤1.2中得到的色谱纸的工作区域进行功能化，步骤如下：用移液枪量取100 μL 金纳米粒子滴于亲水的工作区域，然后在室温下自然干燥，重复5次，二次水洗涤，室温下干燥静置；将1.0 mL 1wt% 氯金酸水溶液和2.5 mL 1wt% 氯铂酸溶液快速混匀，移液枪量取60 μL混合液滴加到工作区域，然后用移液枪迅速量取40 μL新鲜配制的1wt%柠檬酸钠水溶液滴到工作区域，反应30 min后用二次水冲洗，然后用移液枪量取100μL 1 µM 适配体1滴于工作区域孵化1 h, 用pH为 7.4 磷酸缓冲溶液清洗三次后用1wt%的牛血清白蛋白溶液封锁非活性位点。

3.根据权利要求1所述一种用于凝血酶检测的纸基适体荧光传感器的构建方法，其特征在于，在步骤1.4中所述的QDs@ZnO的制备步骤为：称取0.3 g 炭黑溶于60 mL 6 M硝酸中，超声2 h后在120 °C条件下回流24 h，将上述溶液降到室温后离心并干燥，然后将产物溶于二次水后透析三天，得到石墨烯量子点;称取3.5 g可溶性淀粉溶于80 mL沸水中，在85ºC下搅拌5 min后加入6 mmol六水合硝酸锌，通过逐滴加入氢氧化钠将溶液pH调至8-9后继续加热30 min，然后将获得的沉淀离心、洗涤并在500 ºC下焙烧2 h获得多孔氧化锌，称取0.6 g获得的多孔氧化锌溶于0.1 mM的对巯基苯胺溶液中搅拌4 h；移液枪量取500μL合成好的量子点与2 mL功能化的氧化锌混合后在10 mg·mL^-1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和20 mg·mL^-1的 N-羟基丁二酰亚胺作用下反应30 min，离心，洗涤后溶于3mL磷酸缓冲溶液中 。