[发明专利]高茶氨酸茶树资源快速筛选方法

权利要求书

1.一种高茶氨酸茶树资源快速筛选方法，其特征在于，步骤如下：

S1.候选资源的筛选：利用96孔板酶标仪法，先筛选出氨基酸含量高的茶树资源，将其作为候选资源；

S2.高茶氨酸茶树资源筛选：利用OPA柱前衍生‐HPLC法测定候选资源中茶氨酸含量，根据茶氨酸含量高低来筛选出高茶氨酸茶树资源；所述候选资源的筛选，具体步骤如下：

S11.L‐谷氨酸标准曲线的绘制：准确称量谷氨酸配制成母液，并配制成不同浓度梯度的工作液用于绘制L‐谷氨酸标准曲线；

S12.茶汤的制备：将茶叶研磨成茶粉，准确称量0.1g样品于10ml的离心管中，用移液管加入10ml的100℃水，混匀后置于100℃水浴锅中加热45min，每隔10min混匀一次；冷却至室温，低速离心后用1ml移液器抽取上清过0.22um滤膜至2mlEP管中备用；

S13.测定吸光值：取1mlS12中备用的茶汤或S11中L‐谷氨酸工作液、0.5mlpH8.0的磷酸缓冲液及茚三酮溶液于2ml的EP管中混匀，置于100℃水浴锅中加热15min，期间每隔3min混匀一次；冷却后，取20ul反应液于96孔酶标板上，并加入230ul水，利用酶标仪测吸光值；

S14.氨基酸含量的计算：根据茶汤氨基酸的吸光值，对照L‐谷氨酸标准曲线推算出氨基酸含量，选出氨基酸含量高的资源即可。

2.根据权利要求1所述高茶氨酸茶树资源快速筛选方法，其特征在于，所述候选资源中茶树氨基酸含量≥3.57％。

3.根据权利要求1所述高茶氨酸茶树资源快速筛选方法，其特征在于，所述茶叶为春季采摘一芽二叶茶树品种。

4.根据权利要求1所述高茶氨酸茶树资源快速筛选方法，其特征在于，所述L‐谷氨酸标准溶液浓度分别为：0.1mg/ml、0.12mg/ml、0.2mg/ml、0.25mg/ml、0.3mg/ml、0.35mg/ml、0.4mg/ml、0.45mg/ml、0.5mg/ml。

5.根据权利要求1所述高茶氨酸茶树资源快速筛选方法，其特征在于，所述高茶氨酸茶树资源筛选，具体步骤还包括茶氨酸标准曲线的绘制。

6.根据权利要求5所述高茶氨酸茶树资源快速筛选方法，其特征在于，所述茶氨酸标准曲线的绘制，具体步骤为准确称取0.1g茶氨酸配制成母液，然后配制成不同浓度梯度的工作液用于绘制标准曲线。

7.根据权利要求6所述高茶氨酸茶树资源快速筛选方法，其特征在于，所述茶氨酸标准溶液浓度分别为20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml、100ug/ml。

8.根据权利要求1所述高茶氨酸茶树资源快速筛选方法，其特征在于，所述高效液相色谱法，具体色谱条件如下：

色谱柱：4.6mm*250mm，5um的C₁₈柱

流动相：A：40mM pH8.0Na₂HPO₄盐溶液；

B：乙腈：甲醇：水体积比为45:45:10

流速：2ml/min

波长：338nm

梯度洗脱程序：0‐1min，流动相A：90％，流动相B：10％；1‐9.8min，流动相A：90％，流动相B：10％；9.8‐10min，流动相A：43％，流动相B：57％；10‐12min，流动相A：0％，流动相B：100％；12‐12.5min，流动相A：0％，流动相B：100％；12.5‐14min，流动相A：90％，流动相B：10％。