[发明专利]一种抗小鼠RCN3蛋白单克隆ScFv抗体及其淘选方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种抗体及抗体药物的开发和生产，具体涉及一种抗小鼠RCN3蛋白单克隆ScFv抗体及其淘选方法，抗小鼠RCN3蛋白抗体的序列及真核表达与抗原检测的方法。

背景技术

小鼠RCN3是一个单拷贝基因，基因序列号为BC055903，位于小鼠的7号染色体上，含有7个外显子，编码328个氨基酸。研究表明，RCN3蛋白位于小鼠内质网分泌途径，含有6个EF-hand结构域的内质网钙离子结合蛋白，与肺I型和II型蛋白增值相关。人工敲除该基因的基因缺失纯合体小鼠在生产后会呼吸不畅并全身紫干而亡，症状与小儿呼吸窘迫综合征相似，但具体作用机制尚不明确。小鼠作为一种哺乳动物模式生物，特别适合用于此方面的研究。在对RCN3蛋白分子生物学作用机制方面的研究中急需特异性识别并结合该蛋白的抗体。但是目前国内尚无抗小鼠RCN3蛋白的抗体可以购买使用。

生物制药是近年来抗体诊断与药物医药行业中增长最迅速的行业之一，抗体已成为生物制药的最大产品类别，在治疗以肿瘤为主的人类多种疾病方面起着重要作用。随着生物技术的不断发展，抗体药物的市场前景将会越来越广泛。随着人类基因组学的进一步深入，越来越多的新靶点和新表位被发现和研究，抗原范围的扩大也必将扩大抗体药物的市场。随着生物技术的不断进步，提高抗体的科研和生产水平的同时也需要降低科研和生产的成本。

发明内容

本发明为解决难以鉴别和筛选小鼠RCN3蛋白的技术难题，公开了一种抗小鼠RCN3蛋白单克隆ScFv抗体及其淘选方法。

为解决上述技术难题，本发明采用以下技术方案：

一种抗小鼠RCN3蛋白单克隆ScFv抗体，所述单克隆ScFv抗体的碱基序列如SEQ ID NO：10所示，所述碱基序列对应的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示。

所述单克隆ScFv抗体包括轻链可变区V_L和重链可变区V_H，所述轻链可变区V_L的氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，所述重链可变区V_H的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。

所述重链可变区含有三个高变区，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示；所述轻链可变区V_L含有三个高变区，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。

所述单克隆ScFv抗体包括由ScFv通过二硫键形成全长的抗体，以及重链可变区和轻链可变区形成的ScFv、Fab、Fab2、IgG、Fv、Fv2、ScFv2或ScFv-Fc2抗体片段。

所述单克隆ScFv抗体的宿主为M13噬菌体，所述M13噬菌体的宿主为大肠杆菌XL1-blue。

一种抗小鼠RCN3蛋白单克隆ScFv抗体的淘选方法，所述淘选方法具体步骤如下：

（1）构建ScFv抗体噬菌体文库；

（2）利用小鼠RCN3蛋白对ScFv抗体噬菌体文库进行筛选，获得展示了高亲和力抗小鼠RCN3蛋白单链ScFv抗体的噬菌体克隆；

（3）高亲和力抗小鼠RCN3蛋白ScFv抗体的噬菌体克隆的活性测定；

（4）以高亲和力的抗小鼠RCN3蛋白ScFv抗体的噬菌体克隆为模板，构建抗小鼠RCN3蛋白ScFv抗体的表达载体；

（5）真核表达抗小鼠RCN3蛋白ScFv-Fc抗体，亲和纯化抗小鼠RCN3蛋白ScFv-Fc抗体及其活性检测。

本发明的有益效果在于：

1.本发明公开了一种对小鼠RCN3蛋白有很高的亲和力，在噬菌体表面展示的，可用于高效筛选的抗体噬菌体文库的构建及其淘选方法和抗体的序列及真核表达与抗原检测的方法。

2.本发明公开的抗小鼠RCN3蛋白单克隆ScFv抗体噬菌体文库构建及其淘选方法可以淘选得到特异性识别并结合小鼠RCN3蛋白分子的ScFv抗体，所述抗体文库构建及其淘选方法对筛选用于小鼠RCN3蛋白相关的检测与疾病防治具有广泛的应用前景。

附图说明

图1为三轮淘选产出噬菌体与小鼠RCN3蛋白结合力检测结果图。

图2为单克隆噬菌体与小鼠RCN3蛋白结合力检测结果图。

图3为小鼠RCN3带有Fc片段的单链ScFv抗体的SDS-PAGE检测结果图。

图4为单克隆ScFv抗体与小鼠RCN3蛋白酶联免疫吸附试验（Elisa）检测结合力结果图。