[发明专利]一种乳酸菌杂交菌种及其制备方法

说明书

本发明特别涉及一种乳酸菌杂交菌种及其制备方法。该乳酸菌杂交菌种，其特殊之处在于：通过保加利亚乳杆菌菌种、嗜热链球菌菌种通过电融合得到乳酸菌杂交菌种。编号CGMCC NO：12911，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。本发明对生产中常用的保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌进行了原生质体电融合，获得了子代稳定的融合菌株，品质优于亲本，简化了菌种保藏流程，将其用于发酵酸奶，大大改善了酸奶风味，简化了酸奶生产流程，而且保证了酸奶长期风味稳定。

（一）技术领域

本发明涉及一种乳酸菌，特别涉及一种乳酸菌杂交菌种及其制备方法。

（二）背景技术

市场上发酵酸奶所用乳酸菌有多种，保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌、嗜酸乳 杆菌等，主要用其中的2种、3种或4种菌种通过合适比例的添加来发酵酸奶，这些乳酸菌生 长特点各异，都需要厌氧高温培养。所以，对菌种的保藏、繁育是乳酸菌生产厂家比较繁重 的一项工作。另外，在酸奶发酵生产过程中，不同菌种配比的不同对最终酸奶的风味、口感 影响很大，配比一旦出现问题，会直接导致酸奶风味、口感的不稳定，影响市场销售和声誉。

要解决这些问题，可以对多种乳酸菌进行杂交，使多种菌的优良性状融合于一株菌上，这样，就可以省却很多菌种保藏的工作，也可以使得用这种杂合菌发酵所得的酸奶长期保持稳定的优良特性。

关于乳酸菌的杂交，张莉滟等做过双歧杆菌与乳杆菌原生质体的融合及筛选,改良了双歧杆菌严格厌氧的特性，陈军等做过产粘瑞士乳杆菌与保加利亚乳杆菌的融合实验，获得了表观粘度优于亲本的融合菌株。但通过融合后能够兼备亲株优点，提高发酵酸奶品质，简化酸奶制作流程的融合菌株却缺乏报道。

本专利就是针对这个问题，对生产中常用的保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌进行了原生质体电融合，获得了子代稳定的融合菌株，用其发酵酸奶，品质优于亲本。

（三）发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种乳酸菌杂交菌种及其制备方法，使多种 乳酸菌的优良性状融合于一株菌上，这样，就可以省却很多菌种保藏的工作，也可以使得用 这种杂合菌发酵所得的酸奶长期保持稳定的优良特性。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种乳酸菌杂交菌种，其特殊之处在于：利用保加利亚乳杆菌菌种、嗜热链球菌菌种通 过电融合得到乳酸菌杂交菌种。

所述的乳酸菌杂交菌种，编号CGMCC NO：12911，保藏单位为CGMCC-中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2016年08月29日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。

所述的乳酸菌杂交菌种的制备方法，包括以下步骤：

A)菌种活化：保藏的保加利亚乳杆菌菌种、嗜热链球菌菌种活化备用；

B)原生质体制备：（1）取培养至对数期的菌液，冰水浴；（2）取3-5mL菌液于离心管中，离 心，弃上清；（3）加3-5mL生理盐水，摇匀，离心，弃上清；（4）加3-5mL原生质体稳定液，摇匀， 离心，弃上清，该步骤重复n次；（5）加4-6 mL过滤酶液，32-42℃水浴，离心，弃上清；（6）加3- 5mL原生质体稳定液，摇匀，离心，弃上清，该步骤重复n次；（7）加3-5mL原生质体稳定液，制 成原生质体悬液，备用，

C)原生质体融合：（1）电击杯无菌处理；（2）取保加利亚乳杆菌，嗜热链球菌紫外诱变致 死率刚好在100%的菌株悬液按1:0.8-1.2混合均匀，无菌操作；（3）设置好电击参数进行电 融合；（4）将电击融合的菌悬液倾注倒平板，36-46 ℃下培养，观察、分离纯化出融合菌种。

所述的乳酸菌杂交菌种的制备方法，优选方案：