[发明专利]一种香椿内生真菌TS8及其次级代谢产物、制备方法和应用

权利要求书

1.一种香椿内生真菌TS8，其特征在于：在无菌操作条件下，将香椿茎在75v%乙醇中浸泡1min，取出后在有效氯3wt%次氯酸钠溶液中浸泡1min，再在75v%乙醇中浸泡30s，然后用无菌水漂洗3次，无菌吸水纸干燥；用灭菌后的剪刀将其剪成0.5cm左右的小块，放在PDA平板培养基上，每板4根，于28℃恒温培养箱培养5d，当植物组织内部向培养基周围长出菌丝时，将菌丝转移到新的PDA平板培养基上划线培养，5d 后分离纯化得到单个菌落，然后转移到PDA斜面培养基试管中，28℃恒温培养5d 后，即获得香椿内生真菌TS8，4℃冰箱保存，备用；该真菌为子囊菌门Ascomycota、子囊菌纲Ascomycetes、粪壳亚纲Sordariomycetidae、粪壳目Sordariales、毛壳科Chaetomiaceae、毛壳属Chaetomium、球毛壳菌Chaetomium globosum，并于2016年9月30日，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号：CGMCCNo.12979。

2.一种制备香椿内生真菌TS8的次级代谢产物的方法，其特征在于，步骤如下：

（1）菌株发酵：

将保藏号为CGMCC No.12979的香椿内生真菌TS8接种到PDA平板培养基上，25-28℃活化培养3-5d，然后接种到盛有PDA液体发酵培养基的锥形三角瓶中，25-28℃、150-180rpm摇床发酵培养6-8d；

（2）菌株次级代谢产物的制备：

将步骤（1）所得菌株TS8的发酵培养液先搅碎，再过滤，得到发酵液和菌丝体；然后采用乙酸乙酯分别对发酵液和菌丝体进行萃取，重复萃取数次，合并萃取液，浓缩制备得到香椿内生真菌TS8的次级代谢产物；其中，对发酵液进行萃取时，乙酸乙酯的用量与发酵液等体积；对菌丝体进行萃取时，乙酸乙酯的用量以浸泡住菌丝体为准。

3.一种制备香椿内生真菌TS8的次级代谢产物的方法，其特征在于，步骤如下：

（1）菌株发酵：

将保藏号为CGMCC No.12979的香椿内生真菌TS8接种到PDA平板培养基上，25-28℃活化培养3-5d，然后接种到盛有PDA液体发酵培养基的锥形三角瓶中，室温静置发酵培养25-30d；

（2）菌株次级代谢产物的制备：

将步骤（1）所得菌株TS8的发酵培养液先搅碎，再过滤，得到发酵液和菌丝体；发酵液用等体积乙酸乙酯萃取，重复萃取数次，合并萃取液，真空浓缩至干，得到发酵液的乙酸乙酯层萃取物；菌丝体用80v%的丙酮水溶液浸泡提取，反复提取数次，合并提取液，真空浓缩至不含丙酮后，再用等体积的乙酸乙酯萃取，重复萃取数次，然后合并萃取液并且真空浓缩至干，得到菌丝体的乙酸乙酯层萃取物；最后合并发酵液与菌丝体的乙酸乙酯层萃取物，即得香椿内生真菌TS8的次级代谢产物。

4.一种利用如权利要求2或3所述制备方法制备的香椿内生真菌TS8的次级代谢产物。

5.一种如权利要求4所述香椿内生真菌TS8的次级代谢产物在降解软腐病欧文氏菌和/或青枯病茄科雷尔氏菌中的应用。