[发明专利]一种脊尾白虾胚胎显微注射方法及利用方法构建mRNA过表达模型在审
申请号: | 201611006768.5 | 申请日: | 2016-11-16 |
公开(公告)号: | CN108070617A | 公开(公告)日: | 2018-05-25 |
发明(设计)人: | 张继泉;宋凤阁;桂天书;相建海 | 申请(专利权)人: | 中国科学院海洋研究所 |
主分类号: | C12N15/89 | 分类号: | C12N15/89;C12N15/873;A01K67/033 |
代理公司: | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人: | 李颖;周秀梅 |
地址: | 266071*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 脊尾白虾 显微注射 胚胎 构建 体外转录 甲壳动物 单细胞期 高渗透压 功能基因 重要理论 注射材料 基因 虾类 应用 成功 研究 | ||
1.一种脊尾白虾胚胎显微注射方法,其特征在于:将高渗透压的显微注射体系在特定的显微注射条件下向脊尾白虾单细胞时期(1细胞)胚胎进行显微注射。
2.按权利要求1所述的脊尾白虾胚胎显微注射方法,其特征在于:所述高渗透压的显微注射体系为显微注射缓冲液和显微注射液;其中,显微注射缓冲液:无酶水配制含终浓度为100mM HEPES和1.5M NaCl的溶液;
显微注射液为注射材料和指示剂;其中,注射材料为经无酶水稀释的体外转录EGFPmRNA,mRNA稀释至400ng/μL;指示剂为酚红溶液。
3.按权利要求1所述的脊尾白虾胚胎显微注射方法,其特征在于:所述显微注射条件为压强为80Pa;显微注射的量为0.5nL;显微注射的时间为0.7s;显微注射后的受精卵培养环境为离体孵育在经0.22μm滤膜抽滤的新鲜海水中。
4.一种利用权利要求1所述脊尾白虾胚胎显微注射方法构建体外转录模型,其特征在于:以体外转录mRNA作为注射材料,采用所述脊尾白虾胚胎显微注射方法,构建体外过表达mRNA的脊尾白虾模型。
5.按权利要求4所述的利用所述脊尾白虾胚胎显微注射方法构建体外转录模型,其特征在于:以体外转录合成的EGFP mRNA作为注射材料,采用所述脊尾白虾胚胎显微注射方法,构建体外过表达EGFP mRNA的脊尾白虾模型。
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