[发明专利]一种Lewis血型抗原检测方法

权利要求书

1.一种Lewis血型抗原检测方法，其特征在于，其包括步骤：

1)设计检测Lewis血型抗原的多重PCR反应引物，以及设定特定的PCR反应条件，将所有位点通过一个PCR反应完成；

2)通过第一代测序方法检测Lewis相关基因FUT2和FUT3的基因型，并通过基因型确定Lewis抗原表型。

2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多重PCR反应的引物序列如下式所示：

3.按权利要求1所述的方法，其特征在于，使用DNA提取试剂盒提取基因组DNA；使用微型离心机或真空处理从全血或淋巴细胞中提取总基因组DNA。

4.按权利要求1所述的方法，其特征在于，PCR扩增的位点包括FUT3：59，202，314位点(358F/R)，508，1067位点(P1F/P1R)，以及FUT2：357，385，428，571，739位点(FUT2 1F/2R)；

PCR反应条件为：1:94℃5min；2:94℃30s；3:Tm 62℃30s；4:72℃30s(To step2 38 cycles)；5:72℃10min。

5.按权利要求1所述的方法，其特征在于，PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳：控制电压在110V，电流在40mA以上；用DNA marker标记产物大小。

6.按权利要求5所述的方法，其特征在于，获得的片段分离后，在紫外灯下切取所需条带，DNA在紫外灯下爆光时间不超过30s。

7.按权利要求5所述的方法，其特征在于，将胶回收产物加入测序仪，通过一代测序Sanger测序法检测序列。

8.按权利要求7所述的方法，其特征在于，对过的的测序图进行基因型分析，采用Chromas软件打开测序图，分析各个位点的情况；将获得基因型整合分析。

9.按权利要求1或8所述的方法，其特征在于，通过基因型确定表型；其中，

FUT3阴性的基因型包括纯合突变：T202C或C314T或G508A或T1067A；杂合突变：T59G/G508A合并T202C/C314T；T59G/T1067A合并T202C/C314T,T59G合并T202C/C314T,T59G/G508A/T1067A合并T202C/C314T；以及T59G纯合突变合并杂合：T202C或C314T或G508A或T1067A；

FUT2阴性包括除FUT3阴性的所有的FUT2纯合突变；

FUT2阳性，FUT3阳性：Le(a-b+)表型；FUT2阴性，FUT3阳性：Le(a+b-)表型；FUT2杂合，FUT3阳性：Le(a+b+)表型；FUT3阴性Le(a-b-)表型。